マウスのLNCRNA-H19とMIR-199A-5Pの間の標的関係を,二重ルシフェラーゼレポーター遺伝子によって確認した。【JST・京大機械翻訳】

Hou Jingying; Zhou Changqing; Zheng Shaoxin; Guo Tianzhu; Long Huibao; Wu Quanhua; Zhong Tingting; Wu Hao; Wang Lei; Wang Tong

文献

J-GLOBAL ID：201702282668463784 整理番号：17A0345285

マウスのLNCRNA-H19とMIR-199A-5Pの間の標的関係を,二重ルシフェラーゼレポーター遺伝子によって確認した。【JST・京大機械翻訳】

Identification of targeting relationship between mouse lncRNA-H19 and miR-199a-5p by dual-luciferase reporter assay

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巻： 32 号： 12 ページ： 2256-2260 発行年： 2016年
JST資料番号： W1465A ISSN： 1000-4718 CODEN： ZBSZEB 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：中国 (CHN) 言語：中国語 (ZH)

目的;長鎖非コードRNA-H19(LNCRNA-H19)ルシフェラーゼレポータープラスミドを構築し、二重ルシフェラーゼレポーター遺伝子技術を用いてマウスのLNCRNA-H19と微小RNA-199A-5P(MIR-199A-5P)の標的関係を検証した。方法;バイオインフォマティクスサイトサイト 2.0によりマウスのLNCRNA-H19とMIR-199A-5Pの潜在的な相補的結合部位を予測した。H19とその突然変異体をルシフェラーゼベクターベクター-2にクローニングし、H19野生型と変異型プラスミドを構築し、制限酵素とシークエンシング法を用いてPSICHECK-2-H19ベクターの構築に成功したかどうかを同定した。H19野生型と変異型プラスミドをそれぞれMIR-199A-5P模倣物,MIR-199A-5P阻害剤,MIR-199A-5Pアナログ陰性対照またはMIR-199A-5P阻害剤と対照した293T細胞で共トランスフェクションした。細胞を収集後,二重ルシフェラーゼレポーターシステムにより異なる群のルシフェラーゼ活性を検出し,LNCRNA-H19とMIR-199A-5Pの標的調節関係を検証した。【結果】;構築した組換えルシフェラーゼレポータープラスミドの配列決定と配列決定は正しく、二重ルシフェラーゼレポーター遺伝子の測定により、MIR-199A-5P模擬陰性対照組と比べ、MIR-199A-5P模擬組換え型H19野生型レポーター遺伝子のルシフェラーゼ活性は著しく低下した。MIR-199A-5P阻害剤群と比較して,MIR-199A-5P阻害剤群のルシフェラーゼ活性は,約49%(P<0.01)減少したが,MIR-199A-5P阻害剤群のそれより有意に高かった(P<0.01)。MIR-199A-5P模倣物,MIR-199A-5P阻害剤,MIR-199A-5Pアナログ陰性対照およびMIR-199A-5P阻害剤は,H19突然変異体のルシフェラーゼ活性に有意な影響を及ぼさなかった。結論;LNCRNA-H19はMIR-199A-5Pを標的化することができ,転写後レベルで直接阻害作用がある。Data from the ScienceChina, LCAS. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

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, 【Automatic Indexing@JST】

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細胞生理一般 , 免疫反応一般 , 遺伝子発現 , 分子遺伝学一般

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