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J-GLOBAL ID：201702284279118105   整理番号：17A1312751

Acinetobacter baumanniiにおけるMsrA蛋白質の原核生物発現ベクターの構築,精製,および酸化ストレス条件下での発現について検討した。【JST・京大機械翻訳】

Construction, purification and expression under oxidative stress for prokaryotic expression vector of acinetobacter baumannii MsrA protein

著者 (2件)： Tan Xiao (邵陽学院医学検験系,湖南 邵陽,422000) ,  Xiao Fei (邵陽学院医学検験系,湖南 邵陽,422000)
資料名： Weishengwu Xue Mianyi Xue Jinzhan  (Weishengwu Xue Mianyi Xue Jinzhan)
巻： 45  号： 1  ページ： 32-35  発行年： 2017年 
JST資料番号： C3784A  ISSN： 1005-5673  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】組換え型プラスミドpET28a-MsrAを構築し,原核生物発現プラスミドを発現させ,精製するためにAcinetobacter baumanniiのメチオニンスルホキシリラーゼA(MsrA)によって発現させた。酸化ストレス条件下におけるMsrAの発現レベルを観察し、その抗酸化機能の研究に根拠を提供する。方法:NdeIとXhoIの切断部位を持つMsrAプライマーを設計し、合成し、PCR法によりMsrA遺伝子を増幅し、pET28a-MsrA組換えプラスミドを構築し、大腸菌に転化した。イソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside、IPTG)を用いて、組換えMsrAタンパク質の発現を誘導し、Ni2+アフィニティークロマトグラフィーにより分離精製した。蛍光定量PCR法を用いて、酸化ストレス条件下におけるMsrAタンパク質の発現量を観察した。【結果】組換え型プラスミドpET28a-MsrAを構築し,SDS-PAGEにより,相対分子量が約22000のバンドを有する組換えMsrA蛋白質を同定し,Ni2+親和性クロマトグラフィーにより精製したMsrA蛋白質を得ることができた。また,酸化ストレスはMsrA蛋白質の発現を急速に誘導した。結論:pET28a-MsrA組換えプラスミド及び発現純化システムを成功裏に構築し、酸化ストレス条件下でMsrAタンパク質の発現がアップレギュレーションされていることが明らかになった。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *原核生物 ,  遺伝子 ,  大腸菌 ,  *酸化ストレス ,  定量的PCR法 ,  *タンパク質 ,  アップレギュレーション ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  プラスミド ,  SDS-PAGE
準シソーラス用語： 分離精製 ,  *原核生物発現 ,  組換体 ,  *発現ベクター ,  *Acinetobacter baumannii , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： Acinetobacter baumannii ,  Methionine sulfoxide reductase A(MsrA) ,  Prokaryotic expression ,  Protein purification ,  Oxidative stress

分類 (3件)： 微生物の生化学  (EG03020N) ,  酵素一般  (EB09010D) ,  分子遺伝学一般  (EC02010J)

タイトルに関連する用語 (8件)： Acinetobacter ,  蛋白質 ,  原核生物発現 ,  ベクター ,  構築 ,  精製 ,  酸化ストレス ,  発現