抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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目的:塩感受性高血圧ラットの心筋線維症と心筋細胞アポトーシスに対する形質転換成長因子β1(TGF-β1)遺伝子サイレンシング脂肪幹細胞(ADSCs)移植の影響を検討する。方法:本実験は,2015年6月から2016年7月にかけて,陝西省の医学実験動物センターの実験室で行われた。in vitroでADSCsを培養し、TGF-β1を標的遺伝子とするmRNAとsiRNA発現プラスミドを構築し、ウイルスをADSCsにトランスフェクションし、第三代ADSCsをレンチウイルスでトランスフェクションし、トランスフェクション時に空白群、対照群、TGF-β1-siRNAトランスフェクション群に分けた。トランスフェクション後3日目と14日目の異なる遺伝子トランスフェクション群におけるADSC TGF-β1蛋白質の発現を,ウエスタンブロット法により検出し,ウェスタンブロット法により検出し,遺伝子移入後の3日目と14日目に検出した。80匹のSPF雄性Dahl塩感受性ラットを選択し、塩感受性高血圧ラットモデルを構築し、乱数表法により、正塩群、高塩群、ADSCs群及びTGF-β1遺伝子サイレンシング群に分け、各群20匹とした。塩化ナトリウム群は0.3%の塩化ナトリウムを与えた。高塩分群には8%塩化ナトリウムを与えた。ADSCs群は8%の塩化ナトリウムで6週間後に尾静脈移植を行い、3日間持続した。TGF-β1遺伝子サイレンシング群ラットは8%塩化ナトリウムで6週間後に尾静脈移植によりTGF-β1遺伝子サイレンシングADSCsを移植し、3d持続した。細胞移植の2週間後に,TGF-β1mRNAの発現をRT-PCRにより検出し,TGF-β1蛋白質の発現をウェスタンブロット法により検出し,4つの群におけるTGF-β1蛋白質の発現をウエスタンブロット法により検出した。左室駆出率(LVEF)および短縮率(FS)を,心エコー検査によって測定し,そして,左心室容積指数(LVMI)を,計算し,そして,心筋細胞の形態を,HE染色によって観察した。そして,心筋細胞の形態を,HE染色によって観察した。蛍光顕微鏡下で心筋組織におけるCM-Diil標識のADSCs分布を観察し、TUNEL法を用いて4群のラット心筋細胞のアポトーシス状況を測定した。結果:(1)蛍光顕微鏡により、CM-Diil標識のADSCsは赤い赤色を呈し、標識率は97%であることが示された。(2)遺伝子導入後3日目と14日目の白い群と対照群のADSC TGF-β1タンパク質の相対的発現量には有意差がなかった(P>0.05)。TGF-β1-siRNAトランスフェクション群におけるADSC TGF-β1蛋白質の相対的発現は,ブランク群および対照群におけるそれらより低かった(P<0.05)。(3)細胞移植の2週間後,TGF-β1遺伝子サイレンシング群におけるTGF-β1mRNAおよび蛋白質の相対的発現は,正常群,高塩群およびADSCs群におけるそれらより低かった。ADSCs群におけるTGF-β1mRNAと蛋白質の相対的発現は,正常食塩群と高塩分群のそれより低く,高塩分群のTGF-β1mRNAと蛋白質の相対的発現は,正常群より高かった(P<0.05)。(4)細胞移植2週間後、高塩群とADSCs群ラットのLVEFとFSは、正塩群とTGF-β1遺伝子サイレンシング群より低く、LVMIは正塩群とTGF-β1遺伝子サイレンシング群より高かった(P<0.05)。ADSCs群とTGF-β1遺伝子サイレンシング群のLVEFとFSは高塩群より高く、LVMIは高塩群より低かった(P<0.05)。正の塩群とTGF-β1遺伝子サイレンシング群のLVEF、FS及びLVMIとの比較には、統計学的有意差が認められなかった(P>0.05)。(5)細胞移植の2週間後に,高塩分群,ADSCs群,TGF-β1遺伝子サイレンシング群のラットのコラーゲン容積は,正塩群より高く,ADSCs群とTGF-β1遺伝子サイレンシング群のラットのコラーゲン容積は,高塩群より低かった。TGF-β1遺伝子サイレンシング群におけるコラーゲン容積のスコアは,ADSCs群におけるそれより低かった(P<0.05)。(6)HE染色結果により、細胞移植2週間後、高塩分群ラットの心筋は明らかに繊維化し、マクロファージ浸潤は明らかに増加し、ADSCs群ラットの心筋繊維化は軽く、TGF-β1サイレンシング群ラットの心臓繊維化は最も軽く、マクロファージ浸潤は最も少なかった。(7)蛍光顕微鏡下では、細胞移植2週間後に、正塩グループと高塩分グループのラット心筋組織にCM-Diil標識のADSCsが発見されなかったが、TGF-β1遺伝子サイレンシンググループのラット心筋組織中のCM-DiilマーカーのADSCsはADSCsグループより多かった(P<0.05)。(8)細胞移植の2週間後に,心筋細胞のアポトーシス率は0,ADSCs群とTGF-β1遺伝子サイレンシング群において高塩分群より低く,TGF-β1遺伝子サイレンシング群における心筋細胞アポトーシス率はADSCs群より低かった(P<0.05)。【結論】TGF-β1遺伝子サイレンシングは,高血圧ラットにおける心筋線維症を効果的に軽減し,心筋細胞アポトーシスを減少させることができる。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
