抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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目的;補腎活血湯含有血清のラット骨髄間葉幹細胞(bonemarrowstemcell,BMSC)の軟骨分化に対する作用を観察する。方法:4週齢のSDラット大腿骨からBMSCを分離し、8週齢のSDラットから補腎活血湯含有血清と空白血清を調製した。体外培養の第3代BMSCを選び、3群に分けた。10%のブランク血清を含むDMEM培地(ブランク群),10%のブランク血清を含むDMEM培地と基礎誘導液(誘導群),10%の補腎活血湯を含む血清を含むDMEM培地と基礎誘導液(薬物含有血清群)。介入後,トルイジンブルー染色とII型コラーゲン免疫組織化学染色を行った。18匹の8週齢のSDラットを無作為にモデル群、BMSC群及び連合群に分け、各群6匹に分け、右前十字靱帯を切断することで各群のラットに対してKOAモデルを作製した。【方法】術後1週間,BMSC群と併用群ラットの右膝関節に5×106mL-1BMSC-PBS溶液(毎回0.1mL,週1回)を注射した。モデル群ラットの右膝関節に等量のPBS溶液を注入した。8週間の介入後、ラットを屠殺し、右側膝関節軟骨及び軟骨下骨組織を取り、HE染色後、光学顕微鏡下で観察を行った。結果:介入7日後、薬物含有血清群の細胞トルイジンブルー染色は陽性で、細胞質は青紫色を呈し、空白群と誘導群の染色はいずれも陰性であった。介入14日後、薬物含有血清群の染色はさらに深くなり、染色面積が増大し、明らかな紫青色を呈し、空白群の染色は陰性で、誘導群には少量の青紫色染色が見られた。7日と14日の介入後,II型コラーゲンの免疫組織化学染色は,ブランク群の陽性染色がないことを示した。介入7日後に、3群ラットのBMSC中II型コラーゲンmRNAレベル、凝集プロテオグリカンmRNAレベルを比較すると、群間差異に統計学的有意差があった(1.02±0.23、1。33±0.11,2.11±0.23,F=47.181,P=0.000;薬物含有血清群のII型コラーゲンmRNAレベル、凝集プロテオグリカンmRNAレベルは空白群と誘導群より高かった(P=0.000、P=0.000;P=0.000、P=0.000)、誘導群のII型コラーゲンmRNAレベル、凝集プロテオグリカンmRNAレベルは空白群より高かった(P=0.017)。薬物介入8週間後、モデル群ラットの膝関節軟骨の表面は粗く、破壊は厳重で、明らかな繊維増殖が見られた。BMSC群の軟骨は部分的に修復し、表面は粗く、細胞の繊維化は明らかではなかった。結論;補腎活血湯の薬物含有血清は体外培養ラットBMSCの軟骨細胞への分化を有効に促進することができる。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】