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J-GLOBAL ID：201802212603263784   整理番号：18A0644789

ブタGM-CSF安定発現細胞系の確立【JST・京大機械翻訳】

The Establishment of a Cell Line Stably Expressing Porcine GM-CSF

著者 (7件)： Li Junmin (桂林医学院,桂林541004;广東海洋大学動物医学系,湛江524088) ,  Yong Yanhong (广東海洋大学動物医学系,湛江,524088) ,  Gong Dongliang (广東海洋大学農学院動物科学系,湛江,524088) ,  Feng Yuan (桂林医学院,桂林,541004) ,  Wei Xuan (桂林医学院,桂林,541004) ,  He Yulin (桂林医学院,桂林,541004) ,  Ju Xianghong (广東海洋大学動物医学系,湛江,524088)
資料名： Xumu Shouyi Xuebao  (Xumu Shouyi Xuebao)
巻： 48  号： 5  ページ： 963-970  発行年： 2017年 
JST資料番号： C2231A  ISSN： 0366-6964  CODEN： CMHPAI  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 本研究の目的は,ブタGM-CSFを安定的に発現する細胞系を確立することであった。本研究では、NCBIで公表されているブタGM-CSF遺伝子配列を用いて、プライマーを設計し、RT-PCR法を用いて、ブタGM-CSFオープンリーディングフレーム(ORF)を増幅した。その長さは435bpであり、144個のヌクレオチドのタンパク質をコードしていることが分かった。この蛋白質の分子量は16.3kuであり,等電点は7.15であった。ヒツジ,ウマ,ネコ,ウシ,イヌおよびヒトとの相同性は,それぞれ77.1%,73.6%,72.2%,71.5%,71.3%および70.8%であった。EcoR IとBamH Iによる酵素消化後,GM-CSF遺伝子をpIRES2-EGFPベクター中に挿入し,pIRES2-EGFP-pGM-CSF組換えプラスミドを構築した。この組換えプラスミドをブタ腸上皮細胞(IPEC-J2)にトランスフェクションした後、G418により陽性細胞をスクリーニングした。トランスフェクション後24時間に,蛍光定量PCRによりGM-CSF mRNA発現量は対照群及び空ベクター群より著しく高く(P<0.01),蛍光顕微鏡下でも大量の緑色蛍光発現が見られた。この細胞株はG418を含む培養液中で30回連続的に継代され、GM-CSF遺伝子とタンパク質レベルの高発現が見られた。本研究は真核細胞発現ベクターpIRES2-EGFP-pGM-CSFとブタGM-CSFを安定的に発現できる細胞系を構築することに成功した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 遺伝子 ,  mRNA ,  定量的PCR法 ,  *タンパク質 ,  酵素的分解 ,  ヌクレオチド ,  トランスフェクション ,  蛍光 ,  蛍光顕微鏡 ,  相同性 ,  ヒト ,  ベクター
準シソーラス用語： EGFP ,  遺伝子配列 ,  *細胞株 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： pig ,  GM-CSF ,  eukaryotic expression ,  stable cell line

分類 (4件)： 蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N) ,  遺伝子操作  (EC02050B) ,  進化論一般  (EC03010Q) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (3件)： ブタ ,  安定発現 ,  細胞系