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J-GLOBAL ID：201802222166142179   整理番号：18A0353168

チトクロームP450酵素ではなくNADPHオキシダーゼは膜アッセイにおけるNADPH依存性ルシゲニン化学ルミネセンスの源である【Powered by NICT】

Cytochrome P450 enzymes but not NADPH oxidases are the source of the NADPH-dependent lucigenin chemiluminescence in membrane assays

著者 (17件)： Rezende Flavia (Institute for Cardiovascular Physiology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Prior Kim-Kristin (Institute for Cardiovascular Physiology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Lowe Oliver (Institute for Cardiovascular Physiology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Wittig Ilka (Functional Proteomics, SFB 815 Core Unit, Goethe-Universitaet, Frankfurt, Germany) ,  Strecker Valentina (Functional Proteomics, SFB 815 Core Unit, Goethe-Universitaet, Frankfurt, Germany) ,  Moll Franziska (Institute for Cardiovascular Physiology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Helfinger Valeska (Institute for Cardiovascular Physiology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Schnuetgen Frank (Institute for Molecular Hematology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Kurrle Nina (Institute for Molecular Hematology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Wempe Frank (Institute for Molecular Hematology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Walter Maria (Institute for Cardiovascular Physiology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Zukunft Sven (Institute for Vascular Signaling, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Luck Bert (Institute for Vascular Signaling, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Fleming Ingrid (Institute for Vascular Signaling, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Weissmann Norbert (University of Giessen, Lung Center, Giessen, Germany) ,  Brandes Ralf P. (Institute for Cardiovascular Physiology, Goethe-University, Frankfurt, Germany) ,  Schroder Katrin (Institute for Cardiovascular Physiology, Goethe-University, Frankfurt, Germany)
資料名： Free Radical Biology & Medicine  (Free Radical Biology & Medicine)
巻： 102  ページ： 57-66  発行年： 2017年 
JST資料番号： D0414C  ISSN： 0891-5849  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 生体組織と細胞におけるNADPHオキシダーゼ(Nox)-誘導された活性酸素種(ROS)の測定は常に課題である。全てのプローブは,感度,特異性あるいは需要高度に特殊化した検出技術に関するディスプレイ限界を利用できる。おそらく容易で,万能で,高感度で特異的な方法を探索するため,多くの研究は,Nox活性を反映していることが示唆されている膜画分におけるNADPH刺激性アッセイを用いた。しかし我々は以前,三重Noxノックアウトマウス(Nox1Nox2Nox4~ / )組織と野生型に比べて細胞におけるこれらのアッセイで活性を見出した。さらに,Nox酵素を過剰発現する無傷細胞の高いROS産生はNADPH刺激性膜アッセイにおいて再現できなかった。このように,これらの試験で得られた信号はNADPHオキシダーゼよりも他の源に由来する。天然蛋白質電気泳動,NADPH刺激性アッセイと質量分析の組み合わせを用いて,ミトコンドリア蛋白質とチトクロームP450は,分析シグナルの可能な源として同定した。が,細胞機能的ミトコンドリア複合体はNADPH刺激性膜アッセイにおける正常活性ミトコンドリアオキシドレダクターゼは,信号の源そうであることを示唆することを示した。P450レダクターゼ,チトクロームb5とP450を過剰発現するミクロソームは,ルシゲニン,L-012とジヒドロエチジウム(DHE)を用いたアッセイにおけるNADPH依存性信号を生成した。Nox4またはNox5を過剰発現するHEK293細胞でのCRISPR/Cas9技術(POR~ / )によるチトクロームP450レダクターゼのノックアウトは,無傷細胞におけるROS産生を妨害しなかった。しかし,POR~ / は非常に同じ細胞の膜画分を用いたNADPH刺激性アッセイにおける信号を消失させた。さらに,アンギオテンシンIIで処理したラット平滑筋細胞の膜はPORのノックアウトではなくp22phoxのノックアウトにより消失したルシゲニンの増加NADPH依存性信号を示した。結論としてチトクロームP450系は,Nox活性化学ルミネセンスに基づく分析の信号の大部分を説明した。Copyright 2018 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【Powered by NICT】

シソーラス用語： ノックアウトマウス ,  HEK293細胞 ,  活性酸素 ,  高感度 ,  *化学ルミネセンス ,  複合体 ,  プローブ ,  *NADPHオキシダーゼ ,  ミトコンドリア ,  質量分析 ,  野生型 ,  生体組織 ,  *チトクロームP450 ,  アデニンヌクレオチド ,  ニコチンアミドヌクレオチド
準シソーラス用語： 過剰発現 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (7件)： NADPHオキシダーゼ ,  NOx ,  ルシゲニン ,  化学ルミネセンス ,  スーパーオキシド ,  活性酸素種 ,  膜分析

分類 (2件)： 細胞生理一般  (EF02010S) ,  酵素一般  (EB09010D)

物質索引 (1件)： NADPH

タイトルに関連する用語 (8件)： チトクロームP450 ,  酵素 ,  NADPHオキシダーゼ ,  アッセイ ,  NADPH ,  依存性 ,  ルシゲニン ,  化学ルミネセンス