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J-GLOBAL ID：201802228078469498   整理番号：18A1135674

無細胞蛋白質発現により産生されるリン酸化および非リン酸化Hckキナーゼドメイン【JST・京大機械翻訳】

Phosphorylated and non-phosphorylated HCK kinase domains produced by cell-free protein expression

著者 (15件)： Katsura Kazushige (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Tomabechi Yuri (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Matsuda Takayoshi (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Yonemochi Mayumi (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Yonemochi Mayumi (Drug Discovery Structural Biology Platform Unit, RIKEN Center for Life Science Technologies, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Mikuni Junko (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Mikuni Junko (Drug Discovery Structural Biology Platform Unit, RIKEN Center for Life Science Technologies, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Ohsawa Noboru (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Terada Takaho (RIKEN Structural Biology Laboratory, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Yokoyama Shigeyuki (RIKEN Structural Biology Laboratory, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Kukimoto-Niino Mutsuko (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Kukimoto-Niino Mutsuko (Drug Discovery Structural Biology Platform Unit, RIKEN Center for Life Science Technologies, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Takemoto Chie (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Shirouzu Mikako (Protein Functional and Structural Biology Team, RIKEN Center for Life Science Technology, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan) ,  Shirouzu Mikako (Drug Discovery Structural Biology Platform Unit, RIKEN Center for Life Science Technologies, 1-7-22 Suehiro-cho, Tsurumi-ku, Yokohama 230-0045, Japan)
資料名： Protein Expression and Purification  (Protein Expression and Purification)
巻： 150  ページ： 92-99  発行年： 2018年 
JST資料番号： W0282A  ISSN： 1046-5928  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： リン酸化は様々な生理学的事象に関与するので,キナーゼと相互作用因子は薬物発見の潜在的標的となり得る。機構的酵素学の観点から阻害剤の開発と改良のために,突然変異体蛋白質を容易に調製することができるので,無細胞蛋白質合成システムは有利である。しかしながら,特に蛋白質キナーゼの場合には,生成物の溶解度は主要な課題の1つである。この問題を克服するために,著者らは,一連のシャペロン遺伝子,dnaK,dnaJ,およびgrpEをコードするプラスミドを持つ大腸菌BL21細胞からシャペロンを補充した抽出物を調製した。細胞破壊手順を探索し,効率的な蛋白質合成システムを構築した。この系を用いて,ヒト造血細胞キナーゼ(HCK)のキナーゼドメインを作製し,以前に著者らのグループ(RK-20449)により開発されたその阻害剤の一つとの分子相互作用についてのさらなる構造情報を得た。より低い反応温度は溶解度を改善し,蛋白質ホスファターゼ(YpoH)の添加は非リン酸化キナーゼドメインの均一生産を促進した。精製生成物の結晶を得て,キナーゼ阻害剤複合体構造を1.7Å分解能で解明した。さらに,合成基質を用いたキナーゼ活性測定の結果は,ペプチド質量マッピングにより確認されたように,キナーゼ活性がTyr416での自己リン酸化により促進されることを示した。Copyright 2018 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 分子間相互作用 ,  ペプチド ,  基質 ,  タンパク質キナーゼ ,  複合体 ,  大腸菌 ,  遺伝子 ,  プラスミド ,  シャペロンタンパク質 ,  *リン酸化 ,  溶解度 ,  ヒト ,  タンパク質合成 ,  *キナーゼ ,  微生物
準シソーラス用語： 阻害剤 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： 造血細胞キナーゼ(Hck) ,  X線結晶学 ,  無細胞蛋白質合成 ,  溶解度 ,  シャペロン ,  自己リン酸化

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子発現  (EC02040Q)

タイトルに関連する用語 (6件)： 無細胞蛋白質 ,  発現 ,  リン酸化 ,  Hck ,  キナーゼ ,  ドメイン