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J-GLOBAL ID：201802232320867566   整理番号：18A1031216

高分解能融解曲線定量PCRによる毒素原性大腸菌の病原性因子の同定と定量化【JST・京大機械翻訳】

Identification and quantification of virulence factors of enterotoxigenic Escherichia coli by high-resolution melting curve quantitative PCR

著者 (4件)： Wang Weilan (Department of Agricultural, Food and Nutritional Science, University of Alberta, Edmonton, Canada) ,  Zijlstra Ruurd T. (Department of Agricultural, Food and Nutritional Science, University of Alberta, Edmonton, Canada) ,  Gaenzle Michael G. (Department of Agricultural, Food and Nutritional Science, University of Alberta, Edmonton, Canada) ,  Gaenzle Michael G. (College of Bioengineering and Food Science, Hubei University of Technology, Wuhan, People’s Republic of China)
資料名： BMC Microbiology (Web)  (BMC Microbiology (Web))
巻： 17  号： 1  ページ： 114  発行年： 2017年 
JST資料番号： U7367A  ISSN： 1471-2180  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 背景:腸毒素産生大腸菌(ETEC)関連下痢の診断は,大腸菌の病原性因子の多様性により複雑である。本研究では,ブタ,すなわちK99,F41,F18,F6及びK88における下痢に関連する5つのETEC線毛をコードする遺伝子を同定し定量するための高分解能融解曲線分析(HRM-qPCR)に基づく多重定量PCRアッセイを開発した。【方法】ETECによって発現された5つの線毛を,複数のHRM-qPCR反応で増幅し,5つの標的遺伝子の同時同定と定量を可能にした。分析は,最も豊富な標的遺伝子の定量を可能にするために較正され,下痢と健常対照の子ブタから得られた30試料の分析によって検証され,標準qPCR検出と比較された。【結果】74.7±0.06から80.5±0.15°Cの範囲の融解温度(Tm)を有する5つのアンプリコンは,HRM-qPCRによってよく分離された。融解ピークの下のアンプリコンの面積は,比率が4.8%(K88)または<1%(すべての他のアンプリコン)を超えた場合,較正混合物中のテンプレートの割合に直線的に相関した。6~7週齢の離乳ブタからの30試料を用いて,この方法の適合性を評価した。これらの動物のうち14匹は,悪い衛生条件の結果,下痢を患った。線毛及びエンテロトキシンをコードする遺伝子をHRM-qPCR及び/又はqPCRにより定量した。多重HRM-qPCRは,標的の全遺伝子コピー数が1×10~5/g湿潤糞便より多い場合に正確な分析を可能にし,HRM曲線は糞便試料中の線毛遺伝子を同時に識別することができた。融解ピーク面積に基づく最も豊富なF18の相対的定量化は,個々のqPCR結果のそれと高度に相関した(P<0.001;r2=0.956)が,より少ない豊富な線毛に対する相関は非常に低かった。【結論】多重HRMアッセイは,ETEC毒性因子を特異的かつ効率的に同定する。それは,優勢な線毛型を正しく示し,さらに他の線毛型の存在/不在の情報を提供し,それは病原体診断のための広い応用を見出すことができた。Copyright 2018 The Author(s). All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： コピー数 ,  *曲線 ,  離乳 ,  病原体 ,  線毛 ,  下痢 ,  融点 ,  エンテロトキシン ,  *定量的PCR法 ,  多重化 ,  動物 ,  遺伝子 ,  *大腸菌
準シソーラス用語： アンプリコン ,  *融解曲線 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： 病原因子 ,  ETEC ,  HRM-QPCR ,  下痢 ,  線毛

分類 (1件)： 微生物検査法  (EG02020G)

引用文献 (57件)：

• Anim Health Res Rev; Escherichia coli in postweaning diarrhea in pigs: an update on bacterial types, pathogenesis, and prevention strategies; JM Fairbrother, É Nadeau, CL Gyles; 6; 2007; 17-39; 10.1079/AHR2005105; CR1;
• J Veterinary Med Ser B; Differences in antibiotic resistance in Escherichia coli, isolated from East-European swine herds with or without prophylactic use of antibiotics; M Docic, G Bilkei; 50; 2003; 27-30; 10.1046/j.1439-0450.2003.00609.x; CR2;
• J Anim Sci; Use of phytogenic products as feed additives for swine and poultry; W Windisch, K Schedle, C Plitzner, A Kroismayr; 86; 2008; E140-E1E8; 10.2527/jas.2007-0459; CR3;
• J Antimicrob Chemother; The European ban on growth-promoting antibiotics and emerging consequences for human and animal health; M Casewell, C Friis, E Marco, P McMullin, I Phillips; 52; 2003; 159-161; 10.1093/jac/dkg313; CR4;
• Poult Sci; History of the use of antibiotic as growth promoters in European poultry feeds; JI Castanon; 86; 2007; 2466-2471; 10.3382/ps.2007-00249; CR5;

タイトルに関連する用語 (7件)： 高分解能 ,  融解曲線 ,  定量PCR ,  毒素原性大腸菌 ,  病原性因子 ,  同定 ,  定量化