文献

J-GLOBAL ID：201802232483439686   整理番号：18A0654714

高親和性スクリーニングモデルの確立と微生物薬物スクリーニングにおけるヒトシクロフィリンA阻害剤の応用【JST・京大機械翻訳】

Establishment of a high-throughput screening model for human CypA inhibitor and its application of screening in the microbial medicine

著者 (7件)： Zheng Haizhou (華北制薬集団新薬研究開発有限責任公司,微生物薬物国家工程研究中心,河北省工業微生物代謝工程技術研究中心,新薬篩選石家庄市工程実験室,石家庄050015) ,  Xu Yan (華北制薬集団新薬研究開発有限責任公司,微生物薬物国家工程研究中心,河北省工業微生物代謝工程技術研究中心,新薬篩選石家庄市工程実験室,石家庄050015) ,  Ren Xiao (華北制薬集団新薬研究開発有限責任公司,微生物薬物国家工程研究中心,河北省工業微生物代謝工程技術研究中心,新薬篩選石家庄市工程実験室,石家庄050015) ,  Shi Ying (華北制薬集団新薬研究開発有限責任公司,微生物薬物国家工程研究中心,河北省工業微生物代謝工程技術研究中心,新薬篩選石家庄市工程実験室,石家庄050015) ,  Lu Xinhua (華北制薬集団新薬研究開発有限責任公司,微生物薬物国家工程研究中心,河北省工業微生物代謝工程技術研究中心,新薬篩選石家庄市工程実験室,石家庄050015) ,  Zhang Xuexia (華北制薬集団新薬研究開発有限責任公司,微生物薬物国家工程研究中心,河北省工業微生物代謝工程技術研究中心,新薬篩選石家庄市工程実験室,石家庄050015) ,  Zheng Zhihui (華北制薬集団新薬研究開発有限責任公司,微生物薬物国家工程研究中心,河北省工業微生物代謝工程技術研究中心,新薬篩選石家庄市工程実験室,石家庄050015)
資料名： Zhongguo Kangshengsu Zazhi  (Zhongguo Kangshengsu Zazhi)
巻： 42  号： 10  ページ： 896-901  発行年： 2017年 
JST資料番号： C2249A  ISSN： 1001-8689  CODEN： ZKZAEY  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的:シクロスポリンAは免疫抑制剤シクロスポリンAの細胞内受容体であり、多種の重要な生理と病理過程と密接に関連し、すでに免疫抑制、ウィルス感染と炎症などの多種類の疾患の重要な研究開発目標になっている。新規な小分子CypA阻害剤をスクリーニングするために,本研究は,蛍光偏光法に基づくCypA阻害剤のハイスループットスクリーニングモデルを確立した。方法:PCR法を用い、ヒト末梢血リンパ細胞からcypA遺伝子を増幅し、大腸菌の組換えによりCypA蛋白を発現し、ニッケルイオン親和性アフィニティークロマトグラフィーを用いてタンパク質精製を行い、FITC標識CsAをトレーサーとしてCypA抑制剤のスクリーニング方法を確立した。【結果】組換蛋白質の純度はSDS-PAGEにより95%以上であった。蛍光偏光測定システムにおけるトレーサFITC標識CsAと組換えCypA濃度の最適化を経て、最適な蛍光偏光反応条件を確定し、その信号対バックグラウンド比を2.0より大きく、Z因子を0.71とした。CsAは用量依存的に蛍光標識のCsAと競合し、CypAに結合し、そのIC50値は221.3nmol/Lであった。確立したスクリーニングモデルを用いて、28215個の微生物二次代謝産物の粗抽出物をスクリーニングし、その中から43個の抑制率が80%以上のサンプルをスクリーニングした。液体クロマトグラフィー-質量分析法によりさらに分析し、その中の17個の真菌の発酵産物中にサイクロスポリン類似体が含まれていることが分かった。結論:本研究では、蛍光偏光法を用いて、微生物代謝産物と蛍光標識プローブとの競合結合CypAを定量測定することで、簡単で、迅速にCypA抑制剤薬物又はシクロスポリン産生菌のハイスループットスクリーニングを行うことができ、後期の薬物研究開発に基礎を築く。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 遺伝子 ,  質量分析 ,  *スクリーニング ,  *親和性 ,  プローブ ,  PCR法 ,  大腸菌 ,  最適化 ,  組換タンパク質 ,  蛍光標識 ,  *ヒト ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  抑制剤 ,  ポリペプチド ,  シクロペプチド
準シソーラス用語： *阻害剤 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： Cyclophilin A ,  Cyclosporin A ,  High-throughput screening ,  Fluorescence polarization

分類 (4件)： 蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N) ,  遺伝子操作  (EC02050B) ,  酵素一般  (EB09010D) ,  分子遺伝学一般  (EC02010J)

物質索引 (1件)： シクロスポリン

タイトルに関連する用語 (9件)： 親和性 ,  スクリーニング ,  モデル ,  微生物 ,  薬物スクリーニング ,  ヒト ,  シクロフィリンA ,  阻害剤 ,  応用