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J-GLOBAL ID：201802234253298637   整理番号：18A0894167

乳ヤギのEGFR蛋白質細胞外ドメインの原核発現とそのポリクローナル抗体の調製【JST・京大機械翻訳】

Prokaryotic expression,purification and preparation of polyclonal antibody for extracellular domain of epidermal growth factor receptor (EGFR) of dairy goat

著者 (5件)： Ma Yue (西北農林科技大学 動物科技学院,陜西省農業分子生物学重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Wang Jianjue (西北農林科技大学 動物科技学院,陜西省農業分子生物学重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Huang Jiangtao (西北農林科技大学 動物科技学院,陜西省農業分子生物学重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Zhang Tianying (西北農林科技大学 動物科技学院,陜西省農業分子生物学重点実験室,陜西 楊凌 712100) ,  Shi Huaiping (西北農林科技大学 動物科技学院,陜西省農業分子生物学重点実験室,陜西 楊凌 712100)
資料名： Xibei Nonglin Keji Daxue Xuebao(Zirankexueban)  (Xibei Nonglin Keji Daxue Xuebao(Zirankexueban))
巻： 45  号： 12  ページ： 1-7  発行年： 2017年 
JST資料番号： C5021A  ISSN： 1671-9387  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]本研究の目的は,乳ヤギ表皮成長因子受容体(EGFR)の細胞外領域の25-644部位の620のアミノ酸配列(ECD配列)を発現させ,ウサギを精製することであった。それは,ヤギのEGFR蛋白質の機能研究のための基礎を築いた。[方法]pMD19-T-EGFRをテンプレートとし、PCR法によりEGFR細胞外領域(ECD)遺伝子の配列を獲得した。pET-32a(+)プラスミドは,pET-32a(+)-ECDの原核生物発現ベクターに構築され,大腸菌BL21(DE3)に導入され,発現された。Ni-ChargedMagBeadsにより組換えタンパク質を精製後、2カ月齢の白色ウサギを免疫し、間接ELISA(iELISA)法により抗体価を測定し、Westernblotにて抗体特異性を測定した。[結果]PCR増幅により、1860bpのEGFR細胞外領域の遺伝子配列が得られ、pET-32a(+)-ECDベクターの構築に成功した。最終濃度が0.8mmol/LのIPTGを加え、37°Cで6時間の誘導後、組換えタンパクが得られ、その分子量は約94kuで、封入体の形で存在する変性タンパク質である。iELISAによる抗体価は1:16000であり、Westernblot検査により、作製したポリクローナル抗体は原核発現のECDタンパク質及びヤギ乳腺上皮細胞とHEK293細胞中のEGFRタンパク質を特異的に識別できることが明らかになった.Westernblotの検査・測定の結果、抗体価は1:16000であることが確認された。.Westernblotの検査・測定の結果により、このタンパク質は原核細胞の中のタンパク質を特異的に識別できることが明らかになった。・・・.Westernblotの検査・測定の結果により、このタンパク質の抗体価は1:16000であり、そして、Westernblotの検査・測定の結果により、このタンパク質の抗体価は1:16000であり、そして、Westernblotの検査・測定では、原核発現のECD蛋白及びヤギ乳腺上皮細胞とHEK293細胞中のEGFR蛋白を特異的に識別できることが明らかになった。[結論]ヤギEGFRポリクローナル抗体の調製に成功し、この抗体は科学研究試験に応用できる。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ベクター ,  組換タンパク質 ,  *抗体 ,  ELISA ,  遺伝子 ,  アミノ酸配列 ,  HEK293細胞 ,  抗体価 ,  封入体 ,  プラスミド ,  PCR法 ,  *EGF受容体 ,  分子量 ,  *ポリクローナル抗体
準シソーラス用語： 大腸菌BL21(DE3) , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (3件)： epidermal growth factor receptor (EGFR) ,  polyclonal antibody ,  prokaryotic expression

分類 (2件)： 抗原・抗体・補体の生産と応用  (ED04030W) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (8件)： 乳 ,  ヤギ ,  EGFR ,  蛋白質 ,  細胞外ドメイン ,  発現 ,  ポリクローナル抗体 ,  調製