抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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抗原またはドナー特異的T細胞免疫を検出するために,新しいフローサイトメトリーに基づく混合リンパ球培養アッセイ(フロー細胞クロスマッチ:Flow-CXM)を開発した。予備研究は,レシピエントにおけるドナー特異的T細胞応答がドナーとレシピエント間のHLAミスマッチ(MM)数と相関することを示した。本研究の目的は,異なるHLA型MMドナーとレシピエントにおけるFlow-CXMの有意性をさらに評価することである。CXM[Fig1:0.1×10~6]照射ドナーPBMCを,0.1×10~6レシピエントのPBMCおよびTh1(IFNγ&IL-2)またはTh2(IL-4,5,10)サイトカイン捕捉ビーズで16時間培養した。細胞を溶解し,捕捉したサイトカインを対応するPE標識2nd抗体により検出した。異なる蛍光を持つビーズをゲート化し,PE染色ビーズ(Flowスポット%)を計数し,ドナー特異的応答T細胞の相対数を表した。すべてのドナーおよびレシピエントサンプルの高分解能HLAタイピングを,NGSまたはSSOによって実行した。合計109対の骨髄ドナーとレシピエントサンプルを,Flow-CXMによってテストした。HLAクラスI(CI)(P<0.05)およびHLAクラスII(P<0.0001)MMグループにおいて,HLA同一グループと比較して,IFNγ応答ではなくIL-2が有意に増加した。さらに,すべての単一または複数抗原または対立遺伝子MM群(A,B,DP,DR,A+C,DR+DPおよびDR+DP+DQ MM)は,HLA同一群と比較して有意にIL-2反応を増加させた。HLA同一群とMM群間のTh2サイトカイン分泌に有意差はなかった。新たに開発したFlow-CXMは,レシピエントにおけるドナーHLA特異的免疫の初期T細胞活性化を24時間以内に検出することができる。複数のT細胞活性化マーカー(Th1/Th2サイトカイン)は単一反応で測定できる。Flow-CXMの方法論は,単純で,敏感で,HLA特異的である。それは,BMTにおけるGVHDおよび細胞拒絶反応を予測し,モニターするための臨床移植において使用される可能性を保持する。ディスプレイを表示した。Copyright 2018 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】