抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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目的;miR-146b-5pによるATRへの標的抑制、A594細胞アポトーシス誘導の作用を研究する。方法;対照群,miR-146b-5p類似体トランスフェクション群,および陰性トランスフェクション群におけるA594細胞の増殖と生存能力を,CCK8実験とクローン形成試験によって観察した。TargetScan7.1とmiRandaソフトウェアを用いて,miR-146b-5p標的のATRを予測した。リアルタイム定量PCR法により,対照群,miR-146b-5p群,およびNegative mimics群のATR mRNA発現の変化を検出し,ATR3-UTR突然変異配列(ATR-3’UTR-mut)と蛍光レポーターベクター実験を行い,ATRに対するmiR-146b-5pの標的効果を検証した。ウェスタンブロット法により、各群の癌細胞におけるATR経路タンパク質ATR、Chk1、p53の発現変化を測定し、フローサイトメトリーにより各群の細胞アポトーシスを測定した。結果;CCK8実験とクローン形成実験の結果は以下の通りであった。対照群と比較すると,miR-146b-5p群の細胞数は減少し,クローン形成率は0.98±0.01から0.57±0.03に低下し,有意差が認められた(P<0.05)。Negative mimics群の細胞数とクローン形成率は0.92±0.03に有意差がなかった(P>0.05)。リアルタイムPCRの結果は,対照群と比較して,miR-146b-5p群におけるATR mRNAの発現が0.96±0.02から0.38±0.03まで減少し,有意差があった(P<0.05)。ナンセンス群におけるATR mRNA発現は,0.94±0.02であり,有意差は認められなかった(P>0.05)。蛍光レポーターの実験結果は以下の通りであった。ATR 3’UTR miR-146b-5p群のATR mRNA発現は0.36±0.03に減少し,有意差が認められた(P<0.05)。ATR 3’UTR-miR miR-146b-5p群におけるATR mRNAの発現は0.96±0.02であった。ウェスタンブロット法により,miR-146b-5p群におけるATR,Chk1およびp53蛋白質の発現が減少した(P>0.05)ことが示されたが,ウェスタンブロット法では有意差は認められなかった(P>0.05)。フローサイトメトリーの結果は,miR-146b-5p群のアポトーシス率が(26±2.18)%増加し,有意差があることを示した(P<0.05)。結論;miR-146b-5pはATRシグナル伝達経路を抑制することにより肺癌A594細胞のアポトーシスを誘導する。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】