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J-GLOBAL ID：201802270053164754   整理番号：18A0036055

【目的】ラットにおけるα7nAchR遺伝子を標的とするshRNA真核細胞発現ベクターおよび組換えアデノウイルスを構築する。【JST・京大機械翻訳】

Construction of Eukaryotic Expression Vector for Short Hairpin RNA Targeting Gene of Rat α7nAchR and Production of Recombinant Adenovirus

著者 (9件)： Wang Dingkun (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合科,武漢,430030) ,  Lu Fuer (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合研究所,武漢,430030) ,  Zou Xin (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合研究所,武漢,430030) ,  Ren Yanlin (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合研究所,武漢,430030) ,  Dong Hui (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合研究所,武漢,430030) ,  Gong Jing (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合研究所,武漢,430030) ,  Fang Ke (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合研究所,武漢,430030) ,  Xu Lijun (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合研究所,武漢,430030) ,  Wang Kaifu (華中科技大学同済医学院附属同済医院中西医結合研究所,武漢,430030)
資料名： Huazhong Keji Daxue Xuebao Yixueban  (Huazhong Keji Daxue Xuebao Yixueban)
巻： 46  号： 4  ページ： 374-379  発行年： 2017年 
JST資料番号： C2694A  ISSN： 1672-0741  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】ラットにおけるニコチン様アセチルコリン受容体α7(α7nAchR)遺伝子の短ヘアピンRNA(shRNA)の真核細胞発現ベクターを構築する。【方法】α7nAchR遺伝子を標的とするDNA鋳型(AY318,AY857,AY444+559,AY318+857)を設計し,合成した。それは,pGenesil-1.1,pGenesil-1.4,pGenesil-1.2,pGenesil-1.3,およびpGenesil-1.3によって,それぞれ線形化されたものと一致していることが示された,そして,それらは,pGenesil-1.3,pGenesil-1.2,およびpGenesil-1.3であった。1つのα7nAchR遺伝子をコード化するshRNAと2つのα7nAchR遺伝子をコードする組換えプラスミドを構築するために,組換えプラスミドを構築した。組換えプラスミドは,DH5a細胞を感染させて,細菌プラスミドを抽出し,特定の酵素消化を行い,1%のアガロースゲル電気泳動を用いて,組換えプラスミドの構築に成功したかどうかを同定した。【方法】組換えプラスミドpGenesilを,組換え型プラスミドpGenesilによって,組換え型プラスミドpGenesilによって,組換えプラスミドpGenesilによって,組換え型アデノウイルスベクターを構築するために,in vitroでの相同組換え法によって,組換え型プラスミドpGenesilから発現させることによって,それぞれ発現させることができた。同じ方法でDH5a細胞を感染させ、組換えアデノウイルスpGSadenoプラスミドの構築に成功したかどうかを同定した。組換え型アデノウイルスDNAを抽出し,HEK293細胞に形質移入し,1.0×1010pfu/mLの力価をもつ組換えアデノウイルスを得た。組換え型アデノウイルスをラットGH3下垂体腫瘍細胞に感染させ、PCR反応により組換えアデノウイルスベクターのα7nAchR遺伝子干渉効果を同定した。結果:制限酵素断片とその大きさにより、AY318、AY857、AY444+559、AY318+857 shRNAを成功的に組換えプラスミドに組み換え、組換えアデノウイルスpGSadeno-shRNAの包装に成功した。組換え型アデノウイルスをHEK293細胞に感染させ,蛍光顕微鏡下で緑色蛍光蛋白質を発現させた。組換え型アデノウイルスはGH3細胞に感染した後にα7nAchR mRNA発現が著しく減少し、しかもpGSadeno-AY857 shRNA干渉効果が最も顕著であった(85%)。【結論】α7nAchR遺伝子発現を有するshRNA真核細胞発現ベクターの構築に成功し,pGSadeno-AY857shRNAは,最も強い遺伝子干渉効果を示した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： in vitro実験 ,  プラスミド ,  HEK293細胞 ,  酵素的分解 ,  mRNA ,  *真核細胞 ,  DNA【核酸】 ,  *遺伝子 ,  遺伝子発現 ,  PCR法 ,  緑色蛍光タンパク質 ,  トランスフェクション
準シソーラス用語： 組換体 ,  *発現ベクター ,  *低分子ヘアピンRNA , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： α7nAchR ,  shRNA ,  gene interference ,  recombinant plasmid vector ,  recombinant adenovirus

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (8件)： ラット ,  遺伝子 ,  標的 ,  shRNA ,  真核細胞 ,  発現ベクター ,  組換えアデノウイルス ,  構築