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J-GLOBAL ID：201802275956057960   整理番号：18A0686049

N蛋白質に基づくPPRVの間接ELISA検出法の確立と応用【JST・京大機械翻訳】

Establishment and application of PPRV indirect ELISA detection method based on N protein

著者 (5件)： Pang Wenjing (西北農林科技大学動物医学院,陜西楊凌,712100) ,  Fu Mingzhe (西北農林科技大学動物医学院,陜西楊凌,712100) ,  Zhang Qi (西北農林科技大学動物医学院,陜西楊凌,712100) ,  He Yapeng (西北農林科技大学動物医学院,陜西楊凌,712100) ,  Xu Xingang (西北農林科技大学動物医学院,陜西楊凌,712100)
資料名： Xibei Nonglin Keji Daxue Xuebao(Zirankexueban)  (Xibei Nonglin Keji Daxue Xuebao(Zirankexueban))
巻： 45  号： 11  ページ： 1-8,17  発行年： 2017年 
JST資料番号： C5021A  ISSN： 1671-9387  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]本研究の目的は,小反芻動物ウイルス(PeRV des petits ruminants virus,PPRV)におけるN蛋白質を発現させ,N蛋白質を抗原とする間接的ELISA法を確立することである。[方法]PPRV N蛋白質遺伝子をクローニングし、原核発現ベクターpET28aにクローンし、組換えNタンパクの誘導発現を行い、発現産物に対して純化を行い、Western-blotにより鑑定を行った。複合性N蛋白質を抗原として用い、反応条件を最適化し、血清中のPPRV抗体レベルの間接ELISA測定方法を確立し、特異性、感度と再現性試験を行い、最後にこの方法を用いて臨床サンプルを検査し、その応用効果を検証した。[結果]原核細胞発現は58kuの組換え型Nタンパク質を獲得し、Western-blot分析により、組み換えタンパク質は良好な特異性と反応性を有し、PPRV間接ELISA法による最適化反応条件は以下の通りであることが分かった。抗原被覆量は400ngであり、血清は1:200倍希釈で2h、酵素の抗二倍は1:8000倍希釈で1h、TMB発色時間は20minで、この最適条件下で、OD450≧0.309は陽性で、逆は陰性であった。特異性試験により、この条件下において、羊羊、羊口瘡、羊ブルセラ菌と羊に対して、血清の検査結果はすべて陰性であることが明らかになった。80の陽性血清を検出し,感度は98.7%であった。再現性試験により、バッチ内とバッチ間のOD450値の変異係数がそれぞれ2.29%~8.65%と2.13%~5.68%であることが分かった。本試験で確立したELISA検査システムによる臨床197の血清に対して検査を行い、陽性率は85.79%で、標準キットとの一致率は96.4%であった。[結論]ELISAによるELISA法は,PPRV抗体レベルの検出に有効であることが示唆された。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 最適条件 ,  再現性 ,  遺伝子 ,  組換タンパク質 ,  ウイルス ,  抗原 ,  酵素 ,  血清 ,  最適化 ,  抗体 ,  *検出法 ,  クローン ,  *ELISA
準シソーラス用語： 特異性 ,  *N蛋白質 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： PPRV ,  N protein ,  prokaryotic expression ,  indirect ELISA

分類 (2件)： バイオアッセイ  (EA03060N) ,  感染症・寄生虫症の診断  (GD01020S)

タイトルに関連する用語 (5件)： N蛋白質 ,  間接 ,  ELISA ,  検出法 ,  応用