抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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【目的】本研究の目的は,Lenzites gibbosaによって生産されたマンガンペルオキシダーゼ(MnP)の配列特性,酵素的性質,および染料の脱色能力を研究し,リグニン分解と染料脱色のための基礎を築くことであった。【方法】精製したサンプルをSDS-PAGEによって検出した後に,唯一のL.gibbosa MnPバンドによって切断した後に,それらのサンプルを得たが,それらの間には,より良い相関があった。Nano LC-ESI-MS/MSによる蛋白質のアミノ酸配列を,Nano LC-ESI-MS/MS法により測定した。 Nano LC-ESI-MS/MSにより測定した。SDS-PAGEによって,蛋白質の分子量と移動度の標準直線を確立し,そして,標準の直線から,純粋な酵素のサンプルの分子量を得た。最適反応温度,温度安定性,最適pH値,およびpH安定性を,酵素活性測定法によって測定した;そして,それらの最適反応温度は,pH値とpH値によって決定された。Michaelweaver-Burk二重逆数法を用いて,Michaelisの動力学定数(Km)を計算した。L.gibbosaの培養液とMnPの純粋な酵素液によるアントラキノン類のアリザリンレッド、アゾ類のコンゴレッド、複素環類の中性赤とトリフェニルメタン類のクリスタルバイオレットなど4種類の異なるタイプの染料の脱色能力を研究した。[結果]タンデム質量分析により、2本のMnPの保存配列のペプチドセグメントをスキャンし、クローニングされた遺伝子Lg-mnp1にコードされたLg-MnP1(GenBank登録番号:ACO92620)配列と完全に一致した。これらの結果は,Lg-MnP1の主要な蛋白質が,45.39kDaの見かけの分子量,35°Cの最適反応温度,および40°C未満の条件下で,一定の触媒活性を持つことを示した。しかし,温度が50°Cを超えると,急速に不活性化した。最適pH値は3.5であり,pHが4.5以上のとき,pH値が2~3のときに最も安定した。2,6-DMPを基質として用いた場合,21°CでのMichaelis定数Kmは6.124mmol L-1.L.gibbosaの培養液による1時間の脱色率はそれぞれアリザリンレッド100%,ニュートラルレッド22.17%,コンゴレッド19.09%であった。クリスタルバイオレットに対する脱色率は非常に低く、36時間の脱色率はわずか0.018%であった。精製したLg-MnP1溶液による染料の最大脱色率は,2時間でそれぞれ,中性赤100%,コンゴレッド95.55%,アリザリンレッド75.85%,クリスタルバイオレット36.57%であった。[結論]SDS-PAGEにより得られた唯一の電気泳動バンドにおけるMnPは,Lg-MnP1.Lg-MnP1が,中温性で,酸性の酵素であることを示している2つの酵素であることが明らかになった。L.gibbosaの菌糸体を含む培養液はアリザリンレッドに対して完全な分解効果を示したが,Lg-MnP1の酵素活性は,菌糸,ラッカーゼ及びMnPsを含む培養液よりもはるかに高かった。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】