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J-GLOBAL ID：201802276778260899   整理番号：18A0656076

SLUG遺伝子を過剰発現させることによって,SKOV3細胞の安定した株を確立した。【JST・京大機械翻訳】

Establishment of ovarian cancer stable SKOV3 cell lines with overexpression and knockout of SLUG protein

著者 (5件)： Lei Jing (天津医科大学,天津,300070) ,  Zhao Ran (天津医科大学,天津,300070) ,  Gao Ru (天津医科大学,天津,300070) ,  Xin Lingbiao (天津医科大学,天津,300070) ,  Liu Xin (天津医科大学,天津,300070)
資料名： Shandong Yiyao  (Shandong Yiyao)
巻： 57  号： 42  ページ： 1-4  発行年： 2017年 
JST資料番号： C3661A  ISSN： 1002-266X  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 目的:レンチウイルスベクターと改良したCRISPR/Cas9遺伝子の編集システムを用いて,SLUG遺伝子を過剰発現させることができる卵巣癌SKOV3細胞の安定な株を構築すること。方法:プラスミドpCMV-Myc-SLUGをテンプレートとしてHA-SLUG遺伝子を増幅し、それをレンチウイルス発現プラスミドpLVX-IRES-Hygに連結した。この組換え発現ベクターpLVX-HA-SLUGをウイルス感染法によりSKOV3細胞(実験群)に感染させ、同じ条件でpLVX-IRES-Hyg空ベクターを作製したレンチウイルスを陰性対照とした。ウェスタンブロット法を用いて,2つの群におけるSLUG蛋白質発現を検出した。(2)SLUG遺伝子を特異的に結合するsgRNAをベクターpX462に結合させ、得られた一組の組換えプラスミドをリポソーム法によりSKOV3細胞に共トランスフェクションし、安定株をスクリーニングし、単クローン細胞(実験群)を選択した。ウェスタンブロット法によりSLUGタンパク質の発現を測定し、空白対照群を設定し、処理を加えなかった。結果:(1)PCRにより増幅した陽性クローンをPCRにより増幅し,PCRにより確認し,DNA配列決定を行い,組換えプラスミドの構築に成功したことを確認した。陰性対照群と実験群におけるSLUGタンパク質の相対発現量はそれぞれ0.92±0.02と3.14±0.04で、実験群のSLUGタンパク発現は陰性対照群より高かった(P<0.01)。2)4つの単クローン細胞を測定し、SLUGタンパク質の相対発現量はそれぞれ0.07±0.01、0.06±0.01、0.21±0.02、0.20±0.01、空白対照群は0.56±0.03であった。実験群におけるSLUG蛋白質の相対的発現は,ブランク対照群におけるそれより低かった(P<0.01)。結論:SLUG遺伝子の過剰発現と安定的なノックダウンによるSKOV3細胞株の構築は成功し、卵巣癌におけるSLUGの作用をさらに検討するために細胞モデルを提供した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： リポソーム ,  ウイルス感染 ,  クローン ,  トランスフェクション ,  レンチウイルス ,  ベクター ,  プラスミド ,  ウェスタンブロット法 ,  *遺伝子 ,  卵巣腫瘍
準シソーラス用語： 対照群 ,  クローン細胞 ,  IRES ,  レンチウイルスベクター ,  *過剰発現 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： SLUG gene ,  lentiviral vector ,  SKOV3 cells ,  ovarian carcinoma ,  cell model

分類 (1件)： 遺伝子操作  (EC02050B)

タイトルに関連する用語 (5件)： Slug ,  遺伝子 ,  過剰発現 ,  SKOV3細胞 ,  株