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J-GLOBAL ID:201802282795099329   整理番号:18A1031218

Lsp3-41I制限修飾系はLysinibacillus sphaericus C3-41の遺伝子操作の主要決定因子である【JST・京大機械翻訳】

The LspC3-41I restriction-modification system is the major determinant for genetic manipulations of Lysinibacillus sphaericus C3-41
著者 (7件):
資料名:
巻: 17  号:ページ: 116  発行年: 2017年 
JST資料番号: U7367A  ISSN: 1471-2180  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: イギリス (GBR)  言語: 英語 (EN)
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【背景】Lysinibacillus sphaericusは,統合された蚊制御プログラムで広く使われており,それは炭水化物を代謝することができない少数の細菌種の1つである。ゲノムレベルでの高い遺伝的保存と遺伝的水平移動の困難さを考慮すると,有効な制限-修飾(R-M)システムが蚊のL.sphaericusに存在すると仮定されている。【結果】本研究において,LspC3-41Iを含む6つのタイプIIR-MシステムをL.sphaericus C3-41ゲノムにおいて予測した。この株からの細胞フリー抽出物(CFE)は,BspRIのアイソシゾマーであるHaeIIIとして,外因性Bacillus/大腸菌シャトルベクターpBu4上で類似の制限とメチル化活性を示すことが分かった。BspH_0498(予測LspC3-41IR)ノックアウト変異体Δ0498および補体株RC0498を構築した。非メチル化pBUB4はC3-41とRC0498のCFEによって消化されるが,Δ0498のそれによっては消化されないことがわかった。さらに,外因性プラスミドpBUB4は,Δ0498への非常に高い効果,RC0498への低い有効性,C3-41への形質転換に変換することができ,LspC3-41Iが菌株C3-41の遺伝的制限障壁の主要決定因子であることを示した。さらに,lspC3-41IRおよびlspC3-41IM遺伝子は,試験した16L.sphaericus株のC3-41以外の他の2株において検出された。これらは全て血清型H5およびMLST配列型(ST)1に属していた。さらに,3つの株は水平に移動せず,この制限は宿主CFEによるin vitroメチル化または市販のメチルトランスフェラーゼM.HaeIIIにより克服できた。これらの結果は,L.sphaericusの遺伝的制限,修飾および進化をさらに研究するための洞察を提供する。また,L.sphaericusの遺伝的操作のための理論的基礎および方法である。【結論】LspC3-41Iは,L.sphaericus C3-41の制限障壁の主要決定因子として同定された。MLSTスキームにより血清型H5とST1に属する16L.sphaericus株の3株のみがLspC3-41Iシステムを含んでいた。2つの異なる方法は,効率的に形質転換体を得るために,3つの分離株の制限障壁を克服するために使用することができる。1)エレクトロポレーション前にプラスミドDNAをメチル化する;2)遺伝子lspC3-41IRをコードする主要な制限エンドヌクレアーゼを削除する。Copyright 2018 The Author(s). All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
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分類 (2件):
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遺伝子の構造と化学  ,  微生物の生化学 
引用文献 (36件):
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