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J-GLOBAL ID：201802284471487190   整理番号：18A0820071

蛋白質-蛋白質相互作用の範囲に対する増加したスループットでの蛋白質架橋キャピラリー電気泳動【JST・京大機械翻訳】

Protein cross-linking capillary electrophoresis at increased throughput for a range of protein-protein interactions

著者 (8件)： Ouimet Claire M. (Department of Chemistry, University of Michigan, Ann Arbor, MI 48109, USA. [e-mail]) ,  Dawod Mohamed ,  Grinias James ,  Assimon Victoria A. ,  Lodge Jean ,  Mapp Anna K. ,  Gestwicki Jason E. ,  Kennedy Robert T.
資料名： Analyst  (Analyst)
巻： 143  号： 8  ページ： 1805-1812  発行年： 2018年 
JST資料番号： A0392A  ISSN： 0003-2654  CODEN： ANALAO  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 蛋白質-蛋白質複合体の親和性と化学量論を測定するためのツールは,細胞機能の支配とPPI調節因子のスクリーニングにおける蛋白質-蛋白質相互作用(PPIs)の役割を解明するために価値がある。PPIsは広範囲の親和性を有し,二量体から高次オリゴマへの化学量論を含むので,このような測定は困難である。また,ほとんどの技術は,蛋白質を得ることが困難な研究を妨げることができる大量の蛋白質を必要とする。蛋白質架橋キャピラリー電気泳動(PXCE)は,PPIsを直接測定する可能性を有し,アトモル量を消費しながら複数のPPIsを分解する。以前にPXCEは高親和性,1:1錯体にのみ使用されてきた;ここでは,PXCEの有用性を拡張し,弱いおよび多量のオリゴマを含む広範囲のPPIsにアクセスした。架橋剤としてのグルタルアルデヒドの使用は,その迅速な反応速度論のために,この方法を進歩させるためのキーであった。10秒の反応時間は,熱ショック蛋白質(3.8±0.7μM)と相互作用する熱ショック蛋白質70(Hsp70)を含む低μMから低nMまでの7つの異なるPPIsの架橋と定量化に十分であることが分かった。蛋白質凝集体の非特異的架橋は,サイズ排除クロマトグラフィーにより評価した蛋白質濃度<20μMで最小であることが分かった。PXCEは蛋白質ヌクレオチド状態または蛋白質結合部位における点突然変異により誘導されたPPI親和性の変化を測定するのに十分高感度であった。さらに,Hsp70単量体,ホモ二量体およびHsp70複合体を含む単一ランでいくつかの相互作用を分離することができ,Hsp70相互作用蛋白質(CHIP)のc末端と複合体を形成した。最後に,PXCEのスループットは試料当たり1分に増加し,スクリーニングにおける有用性の可能性を示唆した。Copyright 2018 Royal Society of Chemistry All Rights reserved. Translated from English into Japanese by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： タンパク質複合体 ,  タンパク質結合 ,  二量体 ,  スクリーニング ,  *タンパク質 ,  単量体 ,  親和性 ,  オリゴマ ,  *相互作用 ,  サイズ排除クロマトグラフィー ,  化学量論 ,  点突然変異 ,  *キャピラリー電気泳動 ,  *スループット
準シソーラス用語： *蛋白質間相互作用 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (1件)： 蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N)

タイトルに関連する用語 (5件)： 蛋白質-蛋白質相互作用 ,  スループット ,  蛋白質 ,  架橋 ,  キャピラリー電気泳動