抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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【目的】卵巣癌細胞株SKOV3におけるリボヌクレオチド還元酵素M2(RRM2)遺伝子の過剰発現によって誘発されたSKOV3細胞におけるシスプラチンの感受性を調査すること。およびRRM2遺伝子を過剰発現するSKOV3細胞の発現を調査するために,RRM2遺伝子を過剰発現させた。方法:SKOV3細胞の総RNAを抽出し、逆転写によりcDNAを獲得し、それをテンプレートとしてPCR反応を行い、RRM2遺伝子を獲得した。組換え型プラスミドpLVX-IRES-RRM2を,制限酵素消化(XhoI,BamHI)によって,RRM2遺伝子をレンチウイルス発現ベクターpLVX-IRES-ZsGreen1に挿入することによって得た。組換えプラスミドをリポフェクタミン2000により293FT細胞にトランスフェクションし,ウイルスを包埋するために組換えプラスミドを用いた。SKOV3細胞を実験群と対照群に分け、実験群はpLVX-IRES-RRM2慢性ウイルスに感染させ、96h後にレンチウイルス感染効率を測定した。対照群はトランスフェクションしなかった。ウェスタンブロット法を用いて,RRM2蛋白質の発現を検出した。フローサイトメトリーを用いて,アポトーシス細胞とアポトーシス細胞を検出し,シスプラチンに対する細胞の感受性を検出した。【結果】組換えプラスミドpLVX-IRES-RRM2は制限酵素XhoIとBamHIによって確認された,そして,配列はRRM2遺伝子配列が正しいことが示されたことを結果は示した,そして,配列決定はRRM2遺伝子配列が正しいことを示した。実験群と対照群におけるRRM2 mRNAの相対的発現は,それぞれ0.280±0.055,0.102±0.022,およびRRM2蛋白質の発現は,それぞれ0.582±0.049と0.228±0.032であり,対照群のそれより高く,実験群は対照群より有意に高かった(P<0.05)。これらの結果は,RRM2遺伝子が過剰発現したSKOV3細胞の構築に成功したことを示した。実験群と対照群のアポトーシス細胞の割合はそれぞれ0.39%±0.08%、9.60%±1.20%で、死亡細胞の割合はそれぞれ26.65%±2.20%、44.96%±2.80%であった。実験群におけるアポトーシス細胞の割合と死亡率は,対照群におけるそれらより低かった(すべてのP<0.01)。結論:RRM2遺伝子過剰発現SKOV3細胞の構築に成功し、RRM2遺伝子過剰発現のSKOV3細胞はシスプラチンに対する感受性が低下した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】
