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J-GLOBAL ID：201802291340078237   整理番号：18A0868737

キュウリS期キナーゼ関連タンパク質Skp1の原核発現とそのポリクローナル抗体の調製【JST・京大機械翻訳】

Prokaryotic Expression of Cucumber Skp1 in Escherichia coli and Preparation of Antiserum

著者 (7件)： Sun Xinyan (河南農業大学 植物保護学院,河南 鄭州,450002) ,  Wei Ying (河南農業大学 植物保護学院,河南 鄭州,450002) ,  Han Xiaoyu (河南農業大学 植物保護学院,河南 鄭州,450002) ,  Wang Zhenyue (河南農業大学 植物保護学院,河南 鄭州,450002) ,  Chen Linlin (河南農業大学 植物保護学院,河南 鄭州,450002) ,  Yan Zhaoling (河南省農業科学院,河南 鄭州,450002) ,  Shi Yan (河南省果樹瓜類生物学重点実験室,河南 鄭州 450002;河南農業大学 植物保護学院,河南 鄭州 450002)
資料名： Huabei Nongxuebao  (Huabei Nongxuebao)
巻： 32  号： 6  ページ： 73-77  発行年： 2017年 
JST資料番号： C2462A  ISSN： 1000-7091  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： S期キナーゼ関連タンパク質1(Skp1)はSCF型E3ユビキチンリガーゼ経路のコア蛋白であり、真核生物の細胞周期、転写調節、シグナル伝達などの細胞過程において重要な役割を果たしている。Skp1の遺伝子機能を深く研究するため、逆転写PCRによりキュウリSkp1遺伝子の全長解読枠を増幅し、Skp1遺伝子の全長オープンリーディングフレームは468個のヌクレオチドからなり、合計155個のアミノ酸をコードし、それを酵素消化により、大腸菌発現ベクターpET-28aにクローンし、組み換えベクターpETSkp1、PCR検証及びクローンシークエンシングによりオープンリーディングフレームの正確性を確定した。組換プラスミドpETSkp1を大腸菌BL21株に形質転換し、IPTGにより誘導発現させ、SDS-PAGE分析により、37°Cで、IPTG(1mmol/L)により、それぞれ3,6、9h、Skp1遺伝子は大腸菌BL21に誘導され、発現量への影響は明らかでなく、3時間の後、発現タンパク質の時間を誘導することが分かった。精製タンパク質を抗原とし、ニュージーランドウサギを免疫し、第5回目の血清用ELISA測定の効果範囲は1:1であった。128000512000.のキュウリ葉の総蛋白を抽出し、得られた抗血清を用いて、さらにWesternBlotにより特異性を測定した結果、抗血清は500倍と1000倍希釈の時に、キュウリ葉中のSkp1タンパク質を特異的に検出できることが分かった。バンドサイズは約20kDaで,Skp1蛋白質の予測と一致した。Data from Wanfang. Translated by JST【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： プラスミド ,  クローン ,  *ポリクローナル抗体 ,  RT-PCR法 ,  形質転換 ,  ELISA ,  遺伝子 ,  アミノ酸 ,  抗血清 ,  *キュウリ ,  *タンパク質 ,  細胞周期 ,  血清 ,  大腸菌
準シソーラス用語： *skp1 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： Cucumber ,  Skp1 ,  Prokaryotic expression ,  Antiserum

分類 (2件)： 遺伝子発現  (EC02040Q) ,  細胞生理一般  (EF02010S)

タイトルに関連する用語 (8件)： キュウリ ,  S期 ,  キナーゼ ,  タンパク質 ,  skp1 ,  発現 ,  ポリクローナル抗体 ,  調製