特許

J-GLOBAL ID：201803018651154601

ヌクレアーゼ切断特異性の評価および改善

発明者： リウ,デービッド,アール. ,  ギリンジャー,ジョン,ポール ,  パッタナヤク,ヴィクラム
出願人/特許権者： プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ ,  リウ,デービッド,アール. ,  ギリンジャー,ジョン,ポール ,  パッタナヤク,ヴィクラム
代理人 (1件)： 葛和 清司
公報種別：特許公報
出願番号（国際出願番号）：特願2014-522918
特許番号：特許第6261500号
出願日： 2012年07月22日
請求項（抜粋）：

【請求項1】 部位特異的ヌクレアーゼの標的部位を同定するための方法であって、前記方法が、 (a)二本鎖の核酸標的部位を切断し、5’オーバーハングを生成する部位特異的ヌクレアーゼを準備するステップであって、前記標的部位が、[左ハーフサイト]-[スペーサー配列]-[右ハーフサイト](LSR)構造を含み、前記ヌクレアーゼが、スペーサー配列内の標的部位を切断するステップと、 (b)前記部位特異的ヌクレアーゼが前記部位特異的ヌクレアーゼの標的部位を含む候補核酸分子を切断するのに適切な条件下で、候補核酸分子のライブラリーに前記部位特異的ヌクレアーゼを接触させるステップであって、各核酸分子が、候補ヌクレアーゼ標的部位および一定の挿入配列を含む配列のコンカテマーを含むステップと、 (c)前記部位特異的ヌクレアーゼにより2回切断され、一方の側に左ハーフサイトおよび切断スペーサー配列が隣接し、他方の側に右ハーフサイトおよび切断スペーサー配列が隣接した一定の挿入配列を含む核酸分子の5’オーバーハングを充填し、それによって平滑末端を作製するステップと、 (d)ステップ(c)の核酸分子の左ハーフサイト、右ハーフサイト、および/またはスペーサー配列の配列を決定することにより、前記部位特異的ヌクレアーゼにより切断された前記ヌクレアーゼ標的部位を同定するステップとを含む、前記方法。

IPC (3件)：

C12N 15/09 ( 200 6.01) ,  C12N 9/16 ( 200 6.01) ,  C12Q 1/68 ( 201 8.01)

FI (3件)：

C12N 15/00 ZNA A ,  C12N 9/16 A ,  C12Q 1/68 Z

引用特許：

出願人引用 (2件)

• 標的化された切断及び組換えの方法及び組成物
  公報種別：公表公報   出願番号：特願2006-523239   出願人：サンガモバイオサイエンシズインコーポレイテッド
• 生物学的活性のあるヌクレアーゼの迅速なインビボ同定法
  公報種別：公表公報   出願番号：特願2010-526938   出願人：サンガモバイオサイエンシーズ,インコーポレイテッド

審査官引用 (2件)

• 生物学的活性のあるヌクレアーゼの迅速なインビボ同定法
  公報種別：公表公報   出願番号：特願2010-526938   出願人：サンガモバイオサイエンシーズ,インコーポレイテッド
• 標的化された切断及び組換えの方法及び組成物
  公報種別：公表公報   出願番号：特願2006-523239   出願人：サンガモバイオサイエンシズインコーポレイテッド

引用文献：

出願人引用 (1件)

• BMC Bioinformatics, 201105, vol.12, no.15, pp.1-9

審査官引用 (1件)

• BMC Bioinformatics, 201105, vol.12, no.15, pp.1-9