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J-GLOBAL ID：201902214935815850   整理番号：19A2744069

酵素タグに対する活性比の比較による酵素変異体のハイスループットスクリーニング【JST・京大機械翻訳】

High-throughput screening of enzyme mutants by comparison of their activity ratios to an enzyme tag

著者 (6件)： Li Yaping (School of Laboratory Medicine, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016, China) ,  Chong Huimin (School of Laboratory Medicine, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016, China) ,  Zhang Xiang (School of Laboratory Medicine, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016, China) ,  Yang Xiaolan (School of Laboratory Medicine, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016, China) ,  Liao Fei (School of Laboratory Medicine, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016, China) ,  Liao Fei (School of Pharmacy and Bioengineering, Chongqing University of Technology, Chongqing, 400054, China)
資料名： Analytical Biochemistry  (Analytical Biochemistry)
巻： 588  ページ： Null  発行年： 2020年 
JST資料番号： H0177B  ISSN： 0003-2697  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 大腸菌アルカリ性ホスファターゼ(ECAP)により,Pseudomonas Aerginosaアリールスルファターゼ(PAAS)のN末端に融合したタグとして,柔軟なリンカーを介してその変異体を用いて,それらの融合型の細胞溶解物における適切な酵素タグへの変異体の活性比の比較を,突然変異体のハイスループット(HTP)スクリーニングのために試験した。マイクロプレートウェルにおける形質転換細胞の融合型とアルカリ性溶解の両方の誘導発現の後,ECAPとPAAS/変異体の活性のHTP分析は,それらの活性比率を引き出すために分光光度法-二重酵素-同時分析を通して実現した。融合型の成功した誘導発現は,細胞溶解物において5.3U/Lより高いECAP活性を必要とした。細胞溶解物における3つの代表的融合PAAS/変異体のうち,類似の蛋白質分解フラグメントがあり,それらの活性比の比較は弱陽性突然変異体の認識を大きく増強した。融合したPAASのM72における飽和変異誘発後,それらの融合型の細胞溶解物におけるPAAS/変異体のECAPに対する活性比は,細胞溶解物におけるそれらの非融合対応物の比活性に比例した。したがって,提案された戦略は,突然変異体のHTPスクリーニングと適用可能な酵素の配列活性相関のHTP解明の両方を吸収していた。Copyright 2019 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 溶解 ,  *スクリーニング ,  アルカリ性ホスファターゼ ,  Pseudomonas ,  大腸菌 ,  同時分析 ,  アリールスルファターゼ ,  タンパク質分解 ,  吸光分光分析 ,  *酵素 ,  *変異
準シソーラス用語： マイクロプレート ,  *ハイスループット ,  細胞溶解 ,  リンカ , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： 変異ライブラリー ,  酵素タグ ,  融合発現 ,  活動比率 ,  HTPスクリーニング

分類 (5件)： 酵素の応用関連  (EB09100B) ,  生化学的分析法  (EA03030G) ,  酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子操作  (EC02050B) ,  分子遺伝学一般  (EC02010J)

タイトルに関連する用語 (5件)： 酵素 ,  タグ ,  活性 ,  変異体 ,  ハイスループットスクリーニング