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J-GLOBAL ID：201902216346196419   整理番号：19A0532688

鳥の六種類のウイルスの金標識銀染色可視化遺伝子チップの構築と初歩的な応用を検査する。【JST・京大機械翻訳】

Development and Application of Gold Label Silver Stain Visual Chip for Simultaneously Detecting Six Kinds of Poultry Virus Diseases

著者 (8件)： Xiang Hua (四川農業大学動物医学院,成都,611130) ,  Yang Guolin (四川農業大学動物医学院,成都,611130) ,  Cao Sanjie (四川農業大学動物医学院,成都,611130) ,  Huang Xiaobo (四川農業大学動物医学院,成都,611130) ,  Wu Rui (四川農業大学動物医学院,成都,611130) ,  Zhao Qin (四川農業大学動物医学院,成都,611130) ,  Wen Xintian (四川農業大学動物医学院,成都,611130) ,  Wen Yiping (四川農業大学動物医学院,成都,611130)
資料名： Xumu Shouyi Xuebao  (Xumu Shouyi Xuebao)
巻： 49  号： 12  ページ： 2698-2706  発行年： 2018年 
JST資料番号： C2231A  ISSN： 0366-6964  CODEN： CMHPAI  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 本研究は,金標識銀染色技術を利用して,トリ白血病ウイルス(ALV),ニワトリマレック病ウイルス(MDV),伝染性ファブリウイルス(IBDV),ニューカッスル病ウイルス(NDV),トリインフルエンザウイルス(AIV),およびトリインフルエンザウイルス(AIV)を同時に検出することを目的とした。ニワトリ伝染性喉頭気管炎ウイルス(ILTV)の可視化遺伝子チップ。ALV-env、MDV-meq、IBDV-vp2遺伝子をT-A法でクローニングし、本実験室で保存したAIV-np、NDV-f、ILTV-tk遺伝子配列を用いて、オリゴヌクレオチドプローブを設計した。ALV-MDV-IBDV-AIV-NDV-ILTV遺伝子チップアレイを作製した。ビオチン標識プライマーを用いてPCR増幅を行い、チップとハイブリダイゼーション銀染色を行い、肉眼で検査結果を観察し、チップの特異性、感度、安定性を評価し、臨床初歩検証を行った。ALV-env、MDV-meq及びIBDV-vp2の3つの標的遺伝子をクローニングし、その正確性をシークエンシングにより同定した。オリゴヌクレオチドプローブの最適使用濃度は50μmol・L-1で、40°Cで2h交雑し、Nanogold-Streptavidinストレプトアビジン溶液の質量濃度は4μg・mL-1で、銀染色は5minで、明らかな検出信号が見られた。特異的試験は,ALV,MDV,IBDV,NDV,AIV,ILTVの間に交差反応がなく,ニワトリ伝染性気管支炎ウイルスをテンプレートとして作成したPCR増幅マーカーはALV-MDV-IBDV-AIV-NDV-ILTVチップとハイブリダイゼーションしないことを示した。チップ検出の感度は1pgμL-1であった。チップは常温条件下で60日間保存し、4°Cで75日間保存し、有効に検出できる。臨床検査結果はPCRの結果と一致した。本研究では、ALV、MDV、IBDV、NDV、AIVとILTVを同時に検出する金標識銀染色可視化遺伝子チップの構築に成功し、その最適反応条件を確定し、臨床標準化応用に基礎を築いた。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 分子ハイブリダイゼーション ,  PCR法 ,  トリインフルエンザウイルス ,  *可視化 ,  交雑 ,  臨床検査 ,  *遺伝子 ,  *金 ,  ビオチニル化 ,  ストレプトアビジン
準シソーラス用語： 配列解析 ,  特異性 ,  オリゴヌクレオチドプローブ ,  クローニング ,  *銀染色 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (1件)： 遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (10件)： 鳥 ,  ウイルス ,  金 ,  標識 ,  銀染色 ,  可視化 ,  遺伝子チップ ,  構築 ,  応用 ,  検査