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J-GLOBAL ID：201902231538164751   整理番号：19A1978996

PK-15細胞ノックアウトTANK結合キナーゼ1遺伝子によるブタ偽狂犬病ウイルス複製の促進に関する研究【JST・京大機械翻訳】

Genetic Knockout of TANK-binding Kinase 1 Gene in PK-15 Cells Promotes Pseudorabies Virus Replication

著者 (10件)： Liu Xiaohe (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Ba Gen (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Li Jian (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Han Yingqian (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Zhang Shuang (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Ming Shengli (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Du Yongkun (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Chu Beibei (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Yang Guoyu (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002) ,  Wang Jiang (河南農業大学牧医工程学院,鄭州,450002)
資料名： Xumu Shouyi Xuebao  (Xumu Shouyi Xuebao)
巻： 50  号： 6  ページ： 1239-1248  発行年： 2019年 
JST資料番号： C2231A  ISSN： 0366-6964  CODEN： CMHPAI  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： TANK結合キナーゼ1(TBK1)はウイルス感染時のIRF3、IRF7リン酸化及びI型インターフェロン発現のキー酵素であり、抗ウィルスの自然免疫応答と獲得性免疫応答において重要な役割を果たしている。ブタの偽狂犬病ウイルス(PRV)の複製に及ぼすTBK1遺伝子ノックアウトの影響を研究するために,ブタTBK1遺伝子をCRISPR/Cas9技術で安定的にノックアウトし,PK-15細胞の生存率に及ぼすTBK1のノックダウンの影響をCCK-8によって検出した。PRV-GFPの蛍光強度をフローサイトメトリーにより測定し,PRV-gB,PRV-gE,PRV-TK,IL-1β,IFN-βおよびISG15の転写レベルをRT-qPCRにより検出した。PRV-gBとPRV-gEの蛋白質発現をウエスタンブロットで検出し,ウイルスの感染力を滴定により測定し,PRVウイルスの複製に及ぼすTBK1遺伝子ノックアウトPK-15細胞の影響を包括的に評価した。【結果】;TBK1遺伝子エクソン2の3つのsgRNA標的部位は,T7E1によって検出されて,最も高い編集効率のTBK1-sgRNA1細胞系を,単一クローン培養によって選択して,TBK1遺伝子を安定的にノックアウトした6つの単一クローン細胞を得た。CCK-8は,4つの細胞株でランダムに選択され,TBK1のノックダウンは,PK-15細胞の生存率に影響を及ぼさなかった。フローサイトメトリーの結果,PRV-GFP感染陽性細胞は全PK-15細胞の56.89%を占め,PRV-GFP感染陽性細胞はPK-15-TBK1-/-細胞の77.95%を占めた。PK-15-TBK1-/-細胞はPRV-GFP複製を促進できることが示された。RT-qPCRとWB検査により、この細胞株はPRVmRNAの転写とタンパク質の発現を促進できることが明らかになった。力価測定の結果,PRV-QXXはPK-15細胞の複製後TCID50が106.8TCID50・0.1mL-1であったが,PK-15-TBK1-/-細胞で複製後TCID50は108.5TCID50・0であった。1mL-1。また、RT-qPCRの結果は、この細胞株がPRV感染によるIL-1β、IFN-βとISG15の転写のアップレギュレーションを抑制することを示した。以上の結果により、TBK1ノックアウトPK-15細胞株はPRV複製を促進し、IL-1β、IFN-βとISG15転写レベル抑制と関係がある可能性が示唆された。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 定量的PCR法 ,  インターロイキン1 ,  ウェスタンブロット法 ,  クローン ,  フローサイトメトリー ,  *ウイルス複製 ,  タンパク質 ,  アップレギュレーション ,  *型ばらし ,  *遺伝子 ,  ウイルス感染 ,  生存率
準シソーラス用語： 蛋白質発現 ,  遺伝子ノックダウン法 ,  TANK結合キナーゼ 1 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (2件)： 遺伝子の構造と化学  (EC02020U) ,  豚  (FD02040U)

タイトルに関連する用語 (9件)： 細胞 ,  ノックアウト ,  キナーゼ ,  遺伝子 ,  ブタ ,  偽狂犬病 ,  ウイルス複製 ,  促進 ,  研究