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J-GLOBAL ID：201902248257749573   整理番号：19A1860085

リポソームとレンチウイルス媒介P75神経成長因子受容体と神経成長因子トランスフェクション骨髄間葉系幹細胞の効果比較【JST・京大機械翻訳】

Liposome-versus lentivirus-mediated transfection of P75 nerve growth factor receptor and nerve growth factor into bone marrow mesenchymal stem cells

著者 (7件)： Zhu Lunjing (桂林医学院附属医院四肢創傷骨科,广西壮族自治区桂林市,541001) ,  Bei Chaoyong (桂林医学院附属医院四肢創傷骨科,广西壮族自治区桂林市,541001) ,  Duan Jiangtao (桂林医学院附属医院四肢創傷骨科,广西壮族自治区桂林市,541001) ,  Peng Chengfei (桂林医学院附属医院四肢創傷骨科,广西壮族自治区桂林市,541001) ,  Ma Yuegang (桂林医学院附属医院四肢創傷骨科,广西壮族自治区桂林市,541001) ,  Wang Ning (桂林医学院附属医院四肢創傷骨科,广西壮族自治区桂林市,541001) ,  Chen Junyi (桂林医学院附属医院四肢創傷骨科,广西壮族自治区桂林市,541001)
資料名： Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu  (Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu)
巻： 23  号： 21  ページ： 3302-3308  発行年： 2019年 
JST資料番号： C4013A  ISSN： 2095-4344  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 背景;P75神経成長因子受容体(P75neurotrophinreceptor,P75NTR)は異なる細胞において異なるシグナル伝達経路を媒介できるが、骨髄間葉系幹細胞における伝導の調節作用はまだ研究されていない。リポソームとレンチウイルス媒介単遺伝子トランスフェクション細胞技術は成熟しているが、その介在二重遺伝子トランスフェクションの差異の比較はまだ報告されていない。目的;ラットP75NTR、神経成長因子(nervegrowthfactor,NGF)の過発現プラスミド及びレンチウイルスベクターを構築し、リポソームとレンチウイルスが2種類の遺伝子導入骨髄間葉系幹細胞をトランスフェクションする効果及び実用性を比較した。今後の異なる実験要求に従って実験の最適な方案を選択する。方法;ラットP75NTRとNGFの遺伝子プライマーを設計し、ゲノムDNAを抽出し、PCR増幅を行い、プラスミドベクターと組み換え、緑色蛍光を増強したGV358-P75NTR、赤色蛍光を増強させるGV492-NGF過発現プラスミドを構築し、293T細胞にトランスフェクションした。レンチウイルスベクターの超遠心により,レンチウイルスを過剰発現し,ウイルスの力価を測定した。ラット初代骨髄間葉系幹細胞をinvitroで培養し,リポソームLipo3000でプラスミドGV358-P75NTR,GV492-NGFを同時形質移入し,他の群はレンチウイルスで共感染し,陰性対照群とブランク対照群を同時投与した。トランスフェクション後の骨髄間葉系幹細胞の常規培養、第3、5、7、9、12日目に蛍光顕微鏡で赤緑蛍光の発現を観察し、WesternblotでP75NTRとNGF蛋白の発現を測定した。トランスフェクション後7日間培養した骨髄間葉系幹細胞を消化継代培養し、培養3、5、7、9、12日目に蛍光顕微鏡で赤緑蛍光の発現を観察し、WesternblotでP75NTR、NGFタンパク質の発現を測定した。結果と結論;構築したGV358-P75NTR、GV492-NGF過発現プラスミド及びレンチウイルスは実験設計と一致した。2顕微鏡視野における赤緑色蛍光の豊度;リポソームの共トランスフェクション群は最初増加し、その後低下し、レンチウイルス共感染群は持続的に増加した。各時点でレンチウイルス群はリポソーム群より多かった。リポソームトランスフェクション群の継代培養細胞の蛍光発現は未継代前より低かったが、レンチウイルストランスフェクション群には明らかな変化は見られなかった。レンチウイルス群のP75NTRおよびNGF蛋白質発現は,リポソーム群に比して有意に高かったが,P75NTRおよびNGF蛋白質発現は,陰性対照群およびブランク対照群よりも有意に高かった(P<0.05)。4P75NTR、NGFダブル遺伝子はリポソームとレンチウイルス共トランスフェクション法によりラット骨髄間葉系幹細胞に過剰発現できる。リポソームの二重遺伝子トランスフェクション操作は比較的簡便で、実験設備依存性が低く、費用が相対的に低いが、感染効率はレンチウイルスより著しく低いが、レンチウイルス両遺伝子共感染後の標的遺伝子は持続的に発現され、継代後の遺伝子喪失現象が明らかではない。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： プラスミド ,  蛍光 ,  PCR法 ,  *レンチウイルス ,  タンパク質 ,  *リポソーム ,  遺伝子 ,  ラット ,  *トランスフェクション ,  蛍光顕微鏡 ,  継代培養
準シソーラス用語： 蛋白質発現 ,  過剰発現 ,  293T細胞 ,  レンチウイルスベクター , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  分子遺伝学一般  (EC02010J)

タイトルに関連する用語 (7件)： リポソーム ,  レンチウイルス ,  p75 ,  神経成長因子受容体 ,  神経成長因子 ,  トランスフェクション ,  骨髄間葉系幹細胞