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J-GLOBAL ID：201902255595334293   整理番号：19A1184786

GFP蛍光の回復に基づくtRNA発現をモニターする新規in vivoシステムと植物tRNA発現の決定への応用【JST・京大機械翻訳】

Novel in vivo system to monitor tRNA expression based on the recovery of GFP fluorescence and its application for the determination of plant tRNA expression

著者 (4件)： Oohashi Fumiya (Department of Life Science, Shimane University, Matsue, Shimane 690-8504, Japan) ,  Aga Yutaka (Department of Life Science, Shimane University, Matsue, Shimane 690-8504, Japan) ,  Yukawa Yasushi (Graduate School of Natural Sciences, Nagoya City University, Nagoya 467-8501, Japan) ,  Akama Kazuhito (Department of Life Science, Shimane University, Matsue, Shimane 690-8504, Japan)
資料名： Gene  (Gene)
巻： 703  ページ： 145-152  発行年： 2019年 
JST資料番号： E0701B  ISSN： 0378-1119  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 植物細胞で発現したtRNAによるアンバーコドン抑制を定量的に検出する新規アッセイ系を開発した。このアッセイはレポーターとして緑色蛍光蛋白質(GFP)の発現の回復に基づいており,その中で4番目のLysコドン(AAG)がGFP/amberと命名された未熟なアンバーコドンTAGに変化した。GFPとRFP蛍光により細胞数をモニターするために,それぞれ,内部制御としてGFP/amber,サプレッサーtRNA,および赤色蛍光蛋白質(RFF)を持つプラスミドをタマネギ表皮細胞に導入した。最初に,GFP mRNAにおけるTAGコドンを抑制するタバコ(NTS2)からのamberサプレッサーtRNA-Serを調べ,GFP蛍光の回復を導いた。2番目に,2つの異なるtRNA(すなわち,AtY3II-amとAtY3II-amiG7)を用いた。それらの両方とも,以前に損傷した前駆体-tRNAスプライシングを含むが,後者は2つの異なるアプローチ(Szeikowska-KulinskaとBeier,2003)を用いて以前に確認されていなかった。予想されたように,AtY3II-amによるGFP/amberの共発現は緑色蛍光を与えなかったが,AtY3II-amiG7では有意な蛍光が観察された。次に,ArabidopsisからのtRNA-Gln遺伝子ファミリーの5′-調節配列の分析にこのシステムを適用した。17tRNA-Gln遺伝子の各々の5′-フランキング配列を,アンバー抑制tRNA-Ser遺伝子(NTS2/amber)のコード領域とその3′-フランキング配列に融合した。キメラtRNA-Ser遺伝子,GFP/amber及びRFPを共発現させ,GFP又はRFP蛍光強度をレーザ走査顕微鏡を用いて細胞内で測定した。平行して,17種類の元のシロイヌナズナtRNA-Gln遺伝子とNTS2/amberを有するそれらのキメラ遺伝子は,無細胞核抽出物(Yukawaら,1997)ですべて分析された。これらキメラtRNA遺伝子のin vitroおよびin vivo発現の比較は,一般的に類似の結果を示し,各遺伝子の発現における広範囲の分散を伴った。それにもかかわらず,いくつかの遺伝子の発現パターンは,2つの異なる系の間で比較すると明らかに反対であり,植物におけるtRNA発現に関する研究におけるin vivo系の重要性を示した。Copyright 2019 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： タバコ ,  Arabidopsis thaliana ,  前駆体 ,  in vitro実験 ,  キメラ ,  *蛍光 ,  コドン ,  *tRNA ,  細胞核 ,  緑色蛍光タンパク質 ,  mRNA ,  Arabidopsis ,  プラスミド ,  タマネギ
準シソーラス用語： 共発現 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (7件)： アンバーコドン ,  シロイヌナズナ ,  GFP ,  レーザ走査顕微鏡 ,  RFP ,  スプライシング ,  サプレッサーtRNA

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  遺伝子発現  (EC02040Q)

タイトルに関連する用語 (8件)： GFP ,  蛍光 ,  回復 ,  tRNA ,  発現 ,  モニター ,  植物 ,  応用