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J-GLOBAL ID：201902257465161820   整理番号：19A0934564

レンチウイルス仲介安定発現増強小反芻獣疫ウイルス複製のヤギVero/SLAM細胞株の構築【JST・京大機械翻訳】

Establishment of Vero/SLAM Cell Lines with Stable Expression SLAM to Enhanced PPRV Replication Using the Lentiviral Expression System

著者 (9件)： Wu Jinyan (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046) ,  Tian Hong (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046) ,  Meng Xuelian (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046) ,  Hui Xiaoting (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046) ,  Wang Yaojie (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046) ,  Guan Yuhua (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046) ,  Shang Youjun (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046) ,  Liu Yongsheng (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046) ,  Zhang Zhidong (中国農業科学院蘭州獣医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点実験室,農業部畜禽病毒学重点開放実験室,蘭州730046)
資料名： Xumu Shouyi Xuebao  (Xumu Shouyi Xuebao)
巻： 50  号： 1  ページ： 218-226  発行年： 2019年 
JST資料番号： C2231A  ISSN： 0366-6964  CODEN： CMHPAI  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： Gateway技術とレンチウイルス発現系を用いて、ヤギリンパ細胞シグナル活性化因子SLAMをVero細胞ゲノム染色体に安定的に統合し、安定的に発現させ、小反芻獣疫ウイルス(PPRV)の複製を増強できるSLAMのVero陽性細胞サブクローンを構築した。陽性クローンVero/SLAMによるSLAM発現活性,遺伝的安定性,およびPPRV複製に対する増殖効果を検証した。ヤギの末梢血リンパ球を分離し、ゲノムTotalRNAを抽出し、RT-PCRにより完全なORFのSLAM遺伝子を獲得し、BPとLR部位の遺伝子組換え技術を採用した。PackagingMixpLP1,pLP2,およびVSV-Gと共に,pDONR/SLAMのベクターpDONR/SLAMを構築し,293-FT細胞に同時形質移入して,SLAM複製欠損レンチウイルス様粒子を得た。Vero細胞に感染し,コメラチニン耐性スクリーニングにより陽性細胞クローンを得て,標的遺伝子増幅,間接免疫蛍光法,レーザー走査共焦点顕微鏡法,ウエスタンブロット法,およびウエスタンブロット法で検出した。SLAMのゲノムインテグレーション,転写,SLAM蛋白質発現,反応性,およびPPRVのSLAM陽性細胞のサブクローンにおける増殖効果を,細胞変性効果およびReal-timeRT-PCRによってそれぞれ確認した。結果は以下を示した。SLAM受容体遺伝子はVero細胞ゲノム染色体に安定的に整合し、この受容体は細胞周質に発現し、確立された細胞は連続継代が失われず、ウイルスを接種した後に細胞病変の時間は47dから3.5dに短縮され、TCID50・0.1mL-は4である。25は5.67に増え、正常Vero細胞に対して、SLAMのVero細胞を整合し、PPRV特異的細胞受容体を発現したため、PPRVはその感受性を著しく増強した。Vero/SLAM細胞は,PPRVの複製を安定的に発現させた。この細胞発現のSLAMはPPRVの複製を明らかに増強する機能を持ち、細胞モデルレベルからPPRVの複製を増強する重要な標的遺伝子を解明できるだけでなく、PPRV感染による宿主細胞の変化及び生体の発病機序などに対する研究ツールを提供した。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ウェスタンブロット法 ,  RT-PCR法 ,  継代培養 ,  受容体 ,  クローン ,  感受性 ,  トランスフェクション ,  *遺伝子 ,  染色体 ,  スクリーニング ,  ベクター ,  リンパ球
準シソーラス用語： 蛋白質発現 ,  Vero細胞 ,  *SLAM , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (1件)： 遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

タイトルに関連する用語 (10件)： レンチウイルス ,  仲介 ,  安定発現 ,  増強 ,  小反芻獣疫ウイルス ,  複製 ,  ヤギ ,  SLAM ,  細胞株 ,  構築