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J-GLOBAL ID:201902276463290272   整理番号:19A0621617

モデル基質としてビス(2-ヒドロキシエチル)テレフタラートを用いたポリエチレンテレフタレート分解クチナーゼ様酵素Cut190変異体の機能特性化【JST・京大機械翻訳】

Functional characterizations of polyethylene terephthalate-degrading cutinase-like enzyme Cut190 mutants using bis(2-hydroxyethyl) terephthalate as the model substrate
著者 (8件):
資料名:
巻:号:ページ: 290-302  発行年: 2018年 
JST資料番号: U7107A  ISSN: 2377-9098  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: アメリカ合衆国 (USA)  言語: 英語 (EN)
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Cut190*と指定された,Saccharomonospora viridis AHK190,Cut190_S226P/R228Sからのクチン様酵素の突然変異体は,高い熱安定性を有し,高いポリエチレンテレフタレート(PET)分解活性を有する。PET分解酵素の機能的特性化は,それらの構造がPETのそれとは異なるにもかかわらず,一般的にポリ(ブチレンサクシネート-co-アジピン酸)(PBSA)およびp-ニトロフェニル酪酸(pNPB)のようなアクセス可能な基質を用いて行われる。ビス(2-ヒドロキシエチル)テレフタラート(BHET)はPETの成分であり,構造はPBSAおよびpNPBと比較してPETのそれと類似している。したがって,基質としてBHETを用いた分析は,効果的なPET分解を評価するために重要である。本研究では,Ca2+濃度と圧力を含む種々の条件下でBHETを用いてCut190*の酵素活性を分析した。テレフタル酸塩は最終生成物であると推定されたが,中間生成物,モノ(2-ヒドロキシエチル)テレフタラート(MHET))は生成した唯一の生成物であり,これはおそらくMHETの結合親和性が低いためであった。BHETに対するCut190*活性はCa2+の不在下でも観察され,Ca2+濃度の増加と共に増加したが,これはpNPBに対する活性と類似していたが,PBSAに対する活性とは異なった。この違いは基板のサイズに起因する。400MPaまでの高圧下でCut190*と他の高活性変異体Cut190*Q138A/D250C-E296Cの活性も解析した。BHETは37°Cで高圧下で非酵素的に加水分解された。酵素活性は高圧下で維持され,酵素存在下でのBHETの分解は酵素不在下よりも高かった。さらに,Fourier変換赤外分光法を用いた高圧下でのCut190*の構造解析は,ほとんどの酵素分子が400MPa以下の天然構造に存在することを示した。これらの結果は,BHETがPET分解酵素の効果的な機能分析に寄与し,酵素と圧力の組合せが環境に優しいPET分解をもたらすことを示す。Copyright 2019 The Author(s) All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
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酵素一般  ,  酵素生理 
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