文献

J-GLOBAL ID：201902289872445559   整理番号：19A1227656

CRISPR/Cas9技術を用いて、G6PD遺伝子c.392G>T(p.131G>V)の突然変異部位をノックアウトしたHEK293T安定細胞株を構築した。【JST・京大機械翻訳】

Establishment of a stable HEK293T cell line with c.392G>T (p.131G>V) mutation site knockout in G6PD gene using CRISPR/Cas9 technique

著者 (5件)： Zhou Yanxia (重慶医科大学附属儿童医院臨検中心//儿童発育疾病教育部重点実験室//儿童発育重大疾病国家国際科技合作基地//認知発育与学習記憶障碍転化医学重慶市重点実験室,重慶,400014) ,  Hu Weiwei (重慶医科大学附属儿童医院臨検中心//儿童発育疾病教育部重点実験室//儿童発育重大疾病国家国際科技合作基地//認知発育与学習記憶障碍転化医学重慶市重点実験室,重慶,400014) ,  Zhang Hongyang (重慶医科大学附属儿童医院臨検中心//儿童発育疾病教育部重点実験室//儿童発育重大疾病国家国際科技合作基地//認知発育与学習記憶障碍転化医学重慶市重点実験室,重慶,400014) ,  Zou Lin (重慶医科大学附属儿童医院臨検中心//儿童発育疾病教育部重点実験室//儿童発育重大疾病国家国際科技合作基地//認知発育与学習記憶障碍転化医学重慶市重点実験室,重慶,400014) ,  Zhang Penghui (重慶医科大学附属儿童医院臨検中心//儿童発育疾病教育部重点実験室//儿童発育重大疾病国家国際科技合作基地//認知発育与学習記憶障碍転化医学重慶市重点実験室,重慶,400014)
資料名： Nanfang Yike Daxue Xuebao  (Nanfang Yike Daxue Xuebao)
巻： 39  号： 3  ページ： 320-327  発行年： 2019年 
JST資料番号： C2216A  ISSN： 1673-4254  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】c.392G>T(p.131G>V)の突然変異部位であるHEK293T細胞を,CRISPR/Cas9技術で構築し,その遺伝子修復のための信頼できる細胞モデルを提供するため,CRISPR/Cas9技術で,その突然変異部位であるc.392G>T(p.131G>V)の突然変異部位のHEK293T細胞を構築する。方法:G6PD遺伝子c.392G>T(p.131G>V)の突然変異部位に対して、4対のガイドRNA(sgRNA)を標的設計し、Cas9-sgRNAを発現する外来PX458プラスミドを構築し、それをHEK293T細胞内にトランスフェクションした。CRISPR/Cas9の切断効率をフローサイトメトリーによって選別し,次に,CRISPR/Cas9の剪断効率をT7エンドヌクレアーゼ1(T7E1)によって消化し,G6PDmRNAとG6PDmRNAを,制限希釈法によってスクリーニングした。蛋白質発現と細胞機能の変化。結果:G6PD遺伝子c.392G>T(p.131G>V)の突然変異部位に基づくCas9-sgRNA外来PX458プラスミドの構築に成功し、T7E1制限酵素による4対sgRNAの編集効率はそれぞれ6.74%、12.36%、12であった。54%,2.94%。G6PD遺伝子c.392G>T(p.131G>V)の突然変異部位の細胞株の構築に成功し、細胞G6PDmRNA、タンパク発現及びG6PD酵素活性が低下し、細胞増殖能力が低下し、ビタミンK3誘導細胞死が増加した。結論:G6PD遺伝子c.392G>T(p.131G>V)の突然変異部位をノックアウトするHEK293T安定細胞モデルの構築に成功し、後期研究遺伝子の修復に基礎を築いた。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 酵素活性度 ,  *グルコースリン酸デヒドロゲナーゼ ,  *突然変異 ,  *遺伝子 ,  細胞死 ,  DNA制限酵素 ,  編集 ,  プラスミド ,  トランスフェクション ,  タンパク質 ,  フローサイトメトリー
準シソーラス用語： 蛋白質発現 ,  sgRNA ,  *細胞株 ,  *Cas9 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (1件)： 腫ようの化学・生化学・病理学  (GE02030N)

タイトルに関連する用語 (8件)： CRISPR ,  Cas9 ,  G6PD ,  遺伝子 ,  突然変異 ,  ノックアウト ,  細胞株 ,  構築