抄録/ポイント：
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ABSTRACT CRISPR-Cas9技術は,種の前例のないアレイにおけるゲノム工学を可能にし,モデルおよび非モデルシステムにおける生物学的研究を加速させた。しかし,Cas9は本質的に毒性であり,いくつかの生物での使用を制限している。著者らは以前,アピコンプレックス寄生虫Toxoplasma gondiiにおけるCas9毒性を克服する単一ガイドRNA(sgRNA)のserendipitous発見を記述し,任意のアピコンプレックスにおける最初のゲノムワイド機能喪失スクリーニングを可能にした。緩衝sgRNAの存在下でも,低レベルCas9毒性は持続し,Cas9発現の頻繁な損失をもたらし,これらスクリーニングの結果に影響する。同様のCas9仲介毒性も他の生物で記載されている。このため,異なる発現構築物を比較し,Cas9毒性の基礎を理解するための緩衝sgRNAの役割を特性化する,安定なCas9発現に対する要求を明らかにすることを試みた。著者らは,ウイルス2AペプチドがCas9発現の選択と安定性を著しく改良できることを見出した。また,sgRNAは2つの機能を持つ:主に初期ゲノム標的化後のCas9発現構築物の統合を促進し,Cas9毒性を緩和することにより長期寄生虫適応度を二次的に改善することを示した。多様な生物における多様な遺伝的アプローチに直接適用可能な改善された安定性および選択ストリング性を有するCas9の発現に対する一連のガイドラインを定義した。本研究はまたCas9発現の効果をさらに特性化する必要性を強調する。IMPORTANCE Toxoplasma gondiiは,免疫不全患者において生命を脅かす疾患を引き起こす細胞内寄生虫であり,妊娠中に発症するとき,発育中の胎児に影響を及ぼす。密接な関連種はマラリアと重度の下痢を引き起こし,それによって小児死亡率の主因を構成する。世界的な健康へのそれらの重要性にもかかわらず,寄生虫のこのファミリーは enのままである。その顕著な実験的加工性を考えると,T.gondiiは関連寄生虫の研究に対してもモデルとして出現した。遺伝学的アプローチはT.gondiiを含む生物の生物学を研究するための重要なツールである。このように,ゲノム編集のためのCRISPR-Cas9ベース技術の最近の発展は,多数の種の生物学を研究するための我々の能力を大きく拡大した。しかし,いくつかの生物において,CRISPR-Cas9はその固有の毒性のために実装するのが困難であった。本研究は,モデルとしてT.gondiiを用いて観察された毒性の基礎を特徴付け,多様な種におけるCRISPR-Cas9の利用を助けるためのアプローチの開発を可能にした。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
