PPTアーゼ関連化学タグの蛍光標識:標識反応における異なる膜受容体と異なる蛍光団の比較研究【JST・京大機械翻訳】

Amodeo Rosy; Amodeo Rosy; Convertino Domenica; Convertino Domenica; Calvello Mariantonietta; Ceccarelli Lorenzo; Ceccarelli Lorenzo; Bonsignore Fulvio; Ravelli Cosetta; Cattaneo Antonino; Martini Claudia; Luin Stefano; Luin Stefano; Mitola Stefania; Signore Giovanni; Signore Giovanni; Marchetti Laura; Marchetti Laura

文献

J-GLOBAL ID：202002218506477281 整理番号：20A2286842

PPTアーゼ関連化学タグの蛍光標識:標識反応における異なる膜受容体と異なる蛍光団の比較研究【JST・京大機械翻訳】

Fluorolabeling of the PPTase-Related Chemical Tags: Comparative Study of Different Membrane Receptors and Different Fluorophores in the Labeling Reactions

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資料名：
巻： 7 ページ： 195 発行年： 2020年
JST資料番号： U7081A ISSN： 2296-889X 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：スイス (CHE) 言語：英語 (EN)

先進的イメージング実験のセットアップは,関心のある分子の標識のための適切な標識戦略とフルオロフォアの注意深い選択を必要とする。ここでは,興味ある異なる蛋白質の配列に一度挿入されたホスホパンテチニルトランスフェラーゼ酵素(PPTアーゼ)の化学的タグ標的のフルオロ標識性能の評価を可能にする実験的ワークフローを提供した。第1に,S6ペプチドタグを3つの異なる単一パス膜貫通蛋白質(チロシン受容体キナーゼTrkAとVEGFR2と腫瘍壊死因子受容体p75NTR)に融合し,それらの全てが異なる標識で簡便にできる証拠を与えた。更に,S6標識TrkA構築物を選択し,生細胞における膜受容体のPPTase標識に対する8種類の異なる有機蛍光団を試験した。S6-tag陰性細胞培養に添加したときの非特異的インターナリゼーション,S6-TrkA発現細胞の割合,および相対的平均蛍光強度,共役時のそれらの光安定性,および特異的(細胞)対バックグラウンド(ガラス接着)シグナルの比率を系統的に比較した。これは,どのフルオロフォアが実際にこれらの標識反応に推奨されるかを同定することを可能にした。最後に,2つの異なる荷電有機染料による精製YBBR標識Nerve成長因子のPPTase標識を比較した。用いた蛍光団に関係なく,標識収率においていくつかのバッチ間変動を検出した。しかし,蛍光種の精製と生きた初代DRGニューロンとのインキュベーションでは,標識ニューロトロフィンのインターナリゼーションと軸索輸送の両方で有意差は評価できなかった。Copyright 2020 The Author(s) All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

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細胞膜の受容体 , 生物物理的研究法 , 蛋白質・ペプチド一般 , 生物科学研究法一般

引用文献 (32件)：

Amodeo R., Nifosi R., Giacomelli C., Ravelli C., Rosa L. L., Callegari A., et al (2020). BBA - molecular cell research molecular insight on the altered membrane trafficking of TrkA kinase dead mutants. BBA Mol. Cell Res. 1867:118614. doi: 10.1016/j.bbamcr.2019.118614
Bosch P. J., Corrêa I. R. Jr., Sonntag M. H., Ibach J., Brunsveld L., Kanger J. S., et al (2014). Evaluation of fluorophores to label SNAP-Tag fused proteins for multicolor single-molecule tracking microscopy in live cells. Biophys. J. 107 803-814. doi: 10.1016/j.bpj.2014.06.040
Callegari A., Luin S., Marchetti L., Duci A., Cattaneo A., Beltram F. (2012). (ACP)-tagged TrkA receptors in PC12nnr5 cells. J. Neurosci. Methods 204 82-86. doi: 10.1016/j.jneumeth.2011.10.019
Convertino D., Fabbri F., Mishra N., Mainardi M., Cappello V., Testa G., et al (2020). Graphene promotes axon elongation through local stall of Nerve Growth Factor signaling endosomes. Nano. Lett. 20, 3633-3641. doi: 10.1021/acs.nanolett.0c00571
Damioli V., Salvadori A., Beretta G. P., Ravelli C., Mitola S. (2017). Multi-physics interactions drive VEGFR2 relocation on endothelial cells. Sci. Rep. 7:16700. doi: 10.1021/acs.nanolett.0c00571

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