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J-GLOBAL ID：202002219942274423   整理番号：20A0795730

フローサイトメトリーに基づくハイスループットスクリーニングシステムによる汎用ペルオキシダーゼの酸化安定性の改善【JST・京大機械翻訳】

Improvement in oxidative stability of versatile peroxidase by flow cytometry-based high-throughput screening system

著者 (10件)： Ilic Durdic Karla (University of Belgrade-Faculty of Chemistry, Studentski trg 12-16, 11000 Belgrade, Serbia) ,  Ece Selin (PerkinElmer Chemagen Technologie GmbH, Arnold-Sommerfeld-Ring 2, 52499 Baesweiler, Germany) ,  Ece Selin (Institute of Molecular Biotechnology, RWTH Aachen University Worringerweg 1, 52074 Aachen, Germany) ,  Ostafe Raluca (Institute of Molecular Biotechnology, RWTH Aachen University Worringerweg 1, 52074 Aachen, Germany) ,  Ostafe Raluca (Purdue Institute of Inflammation, Immunology and Infectious Disease, Molecular Evolution, Protein Engineering and Production, Purdue University, 207 S. Martin Jischke Dr., West Lafayette, IN 47907, USA) ,  Vogel Simon (Fraunhofer Institute for Molecular Biology and Applied Ecology IME, Forckenbeckstrasse 6, 52074 Aachen, Germany) ,  Schillberg Stefan (Fraunhofer Institute for Molecular Biology and Applied Ecology IME, Forckenbeckstrasse 6, 52074 Aachen, Germany) ,  Fischer Rainer (Institute of Molecular Biotechnology, RWTH Aachen University Worringerweg 1, 52074 Aachen, Germany) ,  Fischer Rainer (Departments of Biological Sciences and Chemistry, Purdue University, 207 S. Martin Jischke Dr., West Lafayette, IN 47907, USA) ,  Prodanovic Radivoje (University of Belgrade-Faculty of Chemistry, Studentski trg 12-16, 11000 Belgrade, Serbia)
資料名： Biochemical Engineering Journal  (Biochemical Engineering Journal)
巻： 157  ページ： Null  発行年： 2020年 
JST資料番号： W1014A  ISSN： 1369-703X  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： Pleurotus eryngii野生型汎用ペルオキシダーゼ(wtVP)はH2O2依存的に構造的に多様な基質を酸化するが,多くの汚染物質を酸化する能力は過剰H2O2存在下で自殺酵素不活性化により制限される。この欠点を解決するために,3×10~6変異VP遺伝子を含むランダム変異誘発ライブラリーを作成し,酵母細胞表面に発現したより高い酸化安定性を持つ酵素をスクリーニングした。これは,基質フルオレセインチアミドを用いたフローサイトメトリーにより達成された。2回のソーティングの後,改良された酸化安定性を有する変異体を発現する細胞の割合は,1%から56%まで増加した。最も安定な変異体は3-5アミノ酸置換を特徴とし,30mM H2O2(wtVPを完全に不活性化する条件)で1時間のインキュベーション後にそれらの初期活性の70%まで保持された。選択した変異体を酵母細胞壁から抽出し,速度論的特性化のために精製した。また,WtVPを有する酵母細胞壁およびアゾ染料(Reactive Black 5)分解の複数サイクルに対する3つの最も安定なVP変異体を調製した。12時間の10サイクル後,2つの変異体はそれらの初期活性の97%以上を保持したが,wtVPの活性は約30%低下した。これらの結果は,著者らのハイスループットスクリーニングシステムが汎用ペルオキシダーゼの酸化安定性を改善し,修復応用のための新規酵素の供給源を提供することを確認した。Copyright 2020 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 汚染物質 ,  酵素 ,  遺伝子 ,  基質 ,  酵母 ,  細胞壁 ,  アゾ染料 ,  ソーティング ,  *ペルオキシダーゼ ,  *フローサイトメトリー ,  インキュベート ,  野生型
準シソーラス用語： アミノ酸置換 ,  酵素不活性化 ,  細胞表面 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (4件)： 有向進化 ,  FACS ,  過酸化水素の安定性 ,  酵母表面ディスプレイ

分類 (2件)： 培養工学一般  (FK02010I) ,  細胞・組織培養法  (EA03040R)

タイトルに関連する用語 (4件)： フローサイトメトリー ,  汎用 ,  ペルオキシダーゼ ,  酸化安定性