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J-GLOBAL ID:202002222270020367   整理番号:20A1180992

大腸菌におけるデアミナーゼ仲介多重ゲノム編集【JST・京大機械翻訳】

Deaminase-mediated multiplex genome editing in Escherichia coli
著者 (7件):
資料名:
巻:号:ページ: 423-429  発行年: 2018年 
JST資料番号: W4779A  ISSN: 2058-5276  資料種別: 逐次刊行物 (A)
記事区分: 原著論文  発行国: ドイツ (DEU)  言語: 英語 (EN)
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真核生物において,CRISPR-Cas9システムは,現在,革命的ゲノム工学ツール1,2として広く使用されている。しかしながら,原核生物において,ヌクレアーゼ仲介ゲノム編集ツールの使用は,その致死性~3,4のため,既に修飾された細胞に対する負の選択に限られている。ここでは,大腸菌で採用されたデアミナーゼ仲介標的ヌクレオチド編集(Target-AID)~5について報告する。ヌクレアーゼ欠損CRISPR-Cas9系に融合したシチジンデアミナーゼPmCDA1は,細胞増殖を損なうことなくシトシン変異を導入することにより大腸菌の標的部位で特異的点変異誘発を達成した。シトシンからチミンへの置換は,主にプロトスペーサ隣接モチーフ遠位側の標的配列の約5塩基窓内に誘導され,これは単一ガイドRNA配列の長さに依存してシフトした。分解タグ(LVAタグ)~7と組み合わせたウラシルDNAグリコシラーゼ阻害剤6の使用は,6つの異なる遺伝子の同時多重編集を可能にするロバストに高い突然変異効率をもたらした。少なくとも41の遺伝子座から成る主要な多重コピー転移酵素遺伝子は,4つの標的配列を用いて同時に編集された。この系はいかなる追加的または宿主依存性因子にも依存しないので,広範囲の細菌に容易に適用できる。細菌におけるヌクレアーゼ仲介ゲノム編集はDNA切断に関連する毒性問題により制限されている。ヌクレアーゼ欠損Cas9に融合したシチジンデアミナーゼの使用は,これらの問題のいくつかをバイパスし,同時に複数の遺伝子座の修飾を可能にする。Copyright The Author(s) 2018 Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
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分類 (1件):
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遺伝子操作 
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