抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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[背景]H9亜型鳥インフルエンザウイルス(AIV)は宿主範囲が拡大し、毒力が増強する傾向があり、他の亜型AIVの再配列に遺伝子を提供し、養鶏業と公衆衛生に極めて大きな脅威を与える。水鳥はインフルエンザウイルスの宿主だけではなく、その天然貯蔵庫であり、鳥インフルエンザウイルスの伝播と変異において重要な作用を発揮している。そのため、水鳥感染を有効に制御することは、養鶏業の健康発展、公衆衛生安全に対して重要な意義を持つ。アヒル腸炎ウイルス(DEV)はヘルペスウイルスに属し、アヒル、ガチョウなどのガントリ類に感染し、産卵の低下及び高い死亡率を引き起こす。DEVはゲノムが大きく、免疫原性が良好で、生存ワクチンベクターを開発する潜在力を有する。[目的]gE遺伝子を欠失し、H9亜型AIVHA遺伝子を発現する組換えウイルスrDEV-△gE-HAを構築し、組換えウイルスrDEV-△gE-HAがDEV-AIVを予防治療する二連組換え活性ベクターワクチンとしての可能性を検討する。[方法]H9N2亜型鳥インフルエンザウイルスHA遺伝子を標的遺伝子とし、HA遺伝子発現カセットを含む転移ベクターpT-gE-HAを構築し、それを緑色蛍光タンパク質標識を持つ組換えrDEV-△gE-GFPと共トランスフェクションしてCEF細胞にトランスフェクションした後、プラークスクリーニングを行った。HA遺伝子を発現した組換えウイルスrDEV-△gE-HAを精製した。組換えウイルスをPCRと遺伝子配列決定によって同定した。組換えウイルスをCEFで20回連続的に継代し,外来遺伝子の継代安定性を測定した。103TCID50で感受性アヒルを免疫し、組換えウイルスrDEV-ΔgE-HAの致死性DEVに対する強毒攻撃の保護効果を分析した。異なる用量(103-106TCID50)rDEV-△gE-HAをアヒルに免疫し、免疫後14、21、28dにそれぞれ血清を採集し、H9血液凝固抑制(HI)抗体を測定し、免疫後28dに測定した。108EID50の用量でH9N2AIV(A/duck/GD/08)を静脈注射し、攻撃後2dに、喉頭スワブを採集し、ウイルス分離試験を行った。【結果】組換えプラスミドpT-gE-HAとrDEV-△gE-GFPをCEF細胞に同時形質移入し,3回のプラークスクリーニングにより,組換えウイルスrDEV-△gE-HAを得た。HA遺伝子はDEVゲノムにうまく挿入され、緑色蛍光タンパク質を入れ替えた。組換えウイルスはCEFにおいて少なくとも20世代安定的に継代できる。組換えウイルスrDEV-ΔgE-HAは103TCID50で感受性アヒルを免疫し、致死性DEV強毒攻撃に抵抗できる。組換えウイルスrDEV-ΔgE-HAはアヒルの14日間免疫し,H9HI抗体の力価を各用量の免疫群で検出した。免疫後21日で,抗体価はわずかに上昇し,103TCID50の免疫群のHI抗体価は1:に達した。24,104-106TCID50の免疫群のHI抗体価は1:であった。22.4-1;23.免疫アヒル後28日、H9N2AIVで攻撃し、103、104、106TCID50免疫組はすべて喉頭スワブからウイルスH9N2まで分離せず、完全に保護でき、喉頭の解毒を阻止し、105TCID50免疫組の保護率は80%(4/5)であった。1/5ウイルス分離陽性。[結論]H9サブタイプAIVHA遺伝子を安定的に発現する組換えDEVの構築に成功し、この組換えウイルスは親毒の免疫原性を保持し、致死性DEVの強毒の攻撃に抵抗できる。免疫アヒルはAIVHI抗体を誘導でき、HI抗体の力価は高くないが、少なくとも80%の免疫アヒルは毒性を阻止する。本研究はDEV-H9亜型AIV二連組換え活性ベクターワクチンの開発に基礎を築いた。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】
