プラスチック分解性組換え酵素(MHETase)の構築とクローニング【JST・京大機械翻訳】

Janatunaim Rifqi Z.; Fibriani Azzania

文献

J-GLOBAL ID：202002234695742664 整理番号：20A2486789

プラスチック分解性組換え酵素(MHETase)の構築とクローニング【JST・京大機械翻訳】

Construction and Cloning of Plastic-degrading Recombinant Enzymes (MHETase)

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資料名：
巻： 14 号： 3 ページ： 229-234 発行年： 2020年
JST資料番号： W3651A ISSN： 1872-2083 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：不明 (ARE) 言語：英語 (EN)

背景:ポリエチレンテレフタレート(PET)は世界で最も広く生産されるポリエステルプラスチックである。PETは,エステル結合への限られたアクセスのため,触媒または生物学的解重合が非常に困難である。その結果,プラスチックは,数百年まで予測される環境中に貯蔵または流れ込む。最も効果的で環境に優しいプラスチック分解法は微生物による生物分解である。PETヒドロラーゼ,PETaseおよびMHETaseに対する2つの特異的酵素を,Ideonella sakaiensis 201-F6から同定した。組換え遺伝子は,PET分解における酵素の有効性を増加させるために作られる。PETase遺伝子の以前の研究は行われているが,最終分解PET産物を生産するために,酵素MHETaseが必要である。そこで,本研究では,MHETase遺伝子構築を行った。【方法】本研究の目標は,I.sakaensis 201-F6由来の天然シグナルペプチドを有するpUCIDTプラスミドにおけるMHETase遺伝子を構築し,構成的プロモーターJ23106を,熱ショックによって大腸菌BL21(DE3)で発現させた。SDS-PAGEと酵素活性を用いた発現分析を,分光光度法とSEMによって分析した。【結果】MHETase遺伝子蛋白質は,Ideonella sakaensis 201-F6,T7ターミネーターおよび構成プロモーターJ23106から天然シグナルペプチドを有するpUCIDT+ガラクトサミンプラスミドで首尾よく構築された。PCR分析は,遺伝子が電気泳動ゲルにおいてバンドサイズ(1813bp)によって細胞にうまく含まれていることを示した。Snap遺伝子を用いた解析,MEGA Xを用いたペアワイズアラインメント,およびNCBIは,MHETase配列がpUCIDTプラスミドでインフレームであることを示した。結論:MHETase遺伝子は,in silico法によりプラスミドでうまく構築された。大腸菌BL21(DE3)に形質転換した合成プラスミドは,フレームにあるMHETase遺伝子配列を含む。したがって,大腸菌BL21(DE3)細胞は,プラスチック分解試験プロセスのためにMHETase蛋白質を生産する可能性を有する。E.coli BL21(DE3)で発現する天然由来の構成的プロモーターとシグナルペプチドを用いて,MHETase遺伝子の構築物を特許する。この特許は,純酵素の精製および環境調整を必要とせずに,全細胞を有するより適用可能なプラスチック分解システムを参照する。Copyright 2020 Bentham Science Publishers All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

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酵素の応用関連 , 高分子廃棄物処理

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