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J-GLOBAL ID：202002236364956825   整理番号：20A2550728

マロン酸からマロニルへのCoA変換のための高分子ミクロゲルにおけるdeGFP-MatBの無細胞蛋白質合成とin situ固定化【JST・京大機械翻訳】

Cell-free protein synthesis and in situ immobilization of deGFP-MatB in polymer microgels for malonate-to-malonyl CoA conversion

著者 (6件)： Koehler Tony (Institute of Physical Chemistry and Polymer Physics, Leibniz-Institut fuer Polymerforschung Dresden e.V., Hohe Str. 6, 01069 Dresden, Germany. [e-mail]) ,  Heida Thomas ,  Hoefgen Sandra ,  Weigel Niclas ,  Valiante Vito ,  Thiele Julian
資料名： RSC Advances (Web)  (RSC Advances (Web))
巻： 10  号： 66  ページ： 40588-40596  発行年： 2020年 
JST資料番号： U7055A  ISSN： 2046-2069  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 本研究では,ミクロゲルを無細胞反応環境として用いて,幾何学制御転写および翻訳下で機能的マロニル-CoAシンテターゼ(deGFP-MatB)を生成した。本アプローチは,マグネシウムおよびグルタミン酸カリウム,DNAならびにポリエチレングリコール(PEG)の濃度スクリーニングに基づくE.coliに基づく無細胞蛋白質合成(CFPS)システムの全蛋白質収率の直線前進最適化と,ポリケチド合成経路の鍵酵素のミクロゲルに基づく生産における革新的使用を組み合わせた。4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチル-モルホリニウムクロリド(DMTMM)-活性化による5′-メチルフラン基によるヒアルロン酸(HA)のカルボキシル基の部分的修飾後,これらを,二官能マクロマーを生じるため,バイオ直交[4+2]Diels-Alder環状付加により,ジベンゾシクロオクチン(DBCO)およびニトリロトリ酢酸(NTA)基により更に官能化した。DBCO基とアジド官能化DNAとのカップリング後,deGFP-MatBに対する遺伝子情報を含む,菌株促進アジド-アルキン環状付加(SPAAC)により,DNA-/NTA-官能化HAマクロマーを,架橋剤としてマレイミド官能化PEG(PEG-mal_2)と共に塩基材料として用いて,油中水(W/O)マイクロエマルションを用いて二官能性ミクロゲルを形成した。形成されたミクロゲルを硫酸ニッケルとインキュベートし,NTA基を活性化し,その目的のために6つのヒスチジン残基(His-tag)を含むdeGFP-MatBの結合部位を提供した。最適化したCFPS混合物をミクロゲルに負荷し,ミクロゲル体積の内部で蛍光の明瞭な増加によって検出されるdeGFP-MatBの生成を開始した。結合及び分離酵素の両方の機能性はマロン酸との反応によって証明され,比色アッセイにより確認されたようにマロニルCoAを生成した。Copyright 2020 Royal Society of Chemistry All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 蛍光 ,  最適化 ,  マグネシウム ,  DNA【核酸】 ,  *タンパク質 ,  アジド ,  環状付加 ,  結合部位 ,  マクロモノマ ,  官能化 ,  *ミクロゲル ,  スクリーニング ,  インキュベート ,  合成酵素 ,  脂肪族カルボン酸 ,  ジカルボン酸

分類 (1件)： 遺伝子発現  (EC02040Q)

物質索引 (1件)： マロン酸

タイトルに関連する用語 (6件)： マロン酸 ,  CoA ,  高分子 ,  ミクロゲル ,  無細胞蛋白質合成 ,  固定化