in vivoでの単色蛍光寿命相互相関分光法【JST・京大機械翻訳】

Stefl Martin; Stefl Martin; Herbst Konrad; Ruebsam Marc; Benda Ales; Knop Michael; Knop Michael

文献

J-GLOBAL ID：202002238309763359 整理番号：20A2245039

in vivoでの単色蛍光寿命相互相関分光法【JST・京大機械翻訳】

Single-Color Fluorescence Lifetime Cross-Correlation Spectroscopy In Vivo

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資料名：
巻： 119 号： 7 ページ： 1359-1370 発行年： 2020年
JST資料番号： B0298A ISSN： 0006-3495 CODEN： BIOJAU 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：オランダ (NLD) 言語：英語 (EN)

蛋白質濃度を定量し,in vivoでの蛋白質相互作用を測定する能力は,細胞内の複雑な過程の理解に必要な重要な情報であるが,生細胞からのこのような情報の獲得は,まだ要求されている。2色蛍光相互相関分光法のような蛍光に基づく方法は,この情報を提供することができるが,測定精度は,検出体積または検出器のクロストークの不完全な重なりのような機器または光学制限によって引き起こされる様々な誤差源によって妨げられる。さらに,標識効率,蛍光蛋白質成熟,光安定性,漂白,および蛍光輝度のような蛍光色素または蛍光色素の性質と特性は,影響を有する。ここでは,類似のスペクトル特性を有する蛍光蛋白質を識別するための平均として寿命差に依存する以前に発表された蛍光寿命相関分光法を利用し,それらを単一色蛍光寿命交差相関分光法(sc-FLCCS)に用いた。1つの励起と1つの検出波長だけを用いて,このセットアップは,色収差と検出器のクロストークから生じる誤差のすべての源を避ける。sc-FLCCSを確立するために,まず,それらの適合性のために複数の緑色蛍光蛋白質(GFP)様蛍光蛋白質を設計し,試験した。これは,新規で,短寿命の単量体GFPと命名されたGFP変異体を,最も短い寿命で同定する。モンテカルロシミュレーションを用いてGFP変異体の異なる組合せの適合性を調べた。2つのGFP,Envyと短寿命の単量体GFPは,sc-FLCCS測定の最良の性能対を構成すると予測された。プロテアソームと相互作用蛋白質間の蛋白質相互作用を測定し,赤色蛍光蛋白質と組み合わせたときの3パートナー間の蛋白質相互作用を測定するために,このGFP対の適用を示した。まとめると,著者らの知見は,従来の二重色蛍光相互相関分光法測定の有効な代替法としてsc-FLCCSを確立する。Copyright 2020 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

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分光法と分光計一般 , 生物物理的研究法

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