抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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ABSTRACTは,薬剤耐性変異の逐次導入がPaenibacillus agaridevoransにおける酵素産生を実質的に増加することを示した。ストレプトマイシンとリファンピンに対する耐性のスクリーニングにより発生した3重変異体YT478(rsmGGln225→ストップコドン,rpsLK56R,およびrpoBR485H)は,野生型株よりも1,100倍多い細胞外酵素シクロイソマルトオリゴ糖グルカントランスフェラーゼ(CITase)を発現した。これらの突然変異体は,指数相中の細胞内S-アデノシルメチオニン濃度が高く,静止期中の蛋白質合成活性を増強した。驚くべきことに,CITase mRNAの最大発現は野生型と三重変異体株で類似していたが,突然変異体は増殖曲線を通してより大きなCITase mRNA発現を示し,酵素過剰産生をもたらした。メタボローム分析は,三重変異体YT478が野生型より高レベルの核酸と解糖代謝産物を有し,YT478変異体細胞が活性化することを示した。三重変異体によるCITaseの産生は,希土類元素,スカンジウムに対する耐性を付与する突然変異を導入することによってさらに増強された。また,この複合薬剤耐性突然変異法は,P.agaridevoransandStreptomyces coelicolorによるアミラーゼ,プロテアーゼ,およびアガラーゼの産生を効果的に増強した。また,この方法は,P.agaridevoransT-3040のCITase遺伝子座と別のシクロイソマルトオリゴ糖産生細菌Paenibacillus sp.598Kの比較によって示されるように,P.agaridevoransCITase遺伝子のサイレントまたは弱い発現も活性化した。この方法の簡単さと広い適用性は,工業用酵素生産だけでなく,サイレントまたは弱発現遺伝子の発現を活性化することにより休眠酵素の同定を促進する。IMPORTANCEEnzyme利用は,産業においてより広くなった。本研究では,酵素産生を著しく増強するリボソーム工学の分子基礎と有効性を評価した。この方法は,その簡単さ,広い応用性,および大規模生産のためのスケーラビリティのために,微生物が新規抗生物質または酵素をコードする多くのサイレントまたは弱い発現遺伝子を含むので,工業的酵素生産だけでなく,新規酵素の同定も促進するはずである。さらに,この研究は,酵素生産に関与する重要な遺伝子(s)の一時的な高発現よりむしろ,菌株改良の新しい機構を提供する。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】