抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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ABSTRACT大腸菌は,各末端で15から40bpの相同重複配列でDNA断片を組み立てる能力を持つ。いくつかの修飾プロトコルは,この簡単で有用なDNAクローニング技術を改善することが報告されている。しかし,大腸菌がそのようなクローニングを達成する分子機構はまだ知られていない。本研究では,E.coliのin vivoクローニングがRecAとRecETレコンビナーゼの両方に依存しないが,XthA,3′から5′エキソヌクレアーゼに依存する証拠を示した。ここでは,XthAによる大腸菌のin vivoクローニングをin vivo大腸菌クローニング(iVEC)と呼ぶ。また,iVEC活性はDNAポリメラーゼI(PolA)のC末端ドメインの欠失により減少することを示した。まとめると,これらの結果はiVECの次の機構を示唆する。第1に,XthAは大腸菌細胞に導入された線状DNAフラグメントの3′末端を切除し,一本鎖5′オーバーハングの曝露をもたらした。次に,相補的一本鎖DNA末端は互いにハイブリダイズし,ギャップはDNAポリメラーゼIによって満たされる。分子レベルでのiVEC機構の解明は,in vivoでのDNAクローニング技術の開発をさらに進めるであろう。著者らは,iVECのための修正ホスト株を用いた無努力変換手順と組み合わせた7つのフラグメントまでの多重フラグメント集合を成功裏に示した。ベクターへのDNAフラグメントのIMPORTANCEクローニングは,組換えDNA技術における基本的技術の1つである。最近,DNAクローニングのためのin vitro組換えシステムは,一度複数のDNA断片の接合を可能にすることが示された。興味深いことに,大腸菌は,細胞中に導入された複数の線形DNAフラグメントを潜在的に集合する。このin vivoクローニングのための改良プロトコルは,in vitro組換え反応によるそれに匹敵する高レベルの使用性を実現した。しかしながら,in vivoクローニングの機構は,非常に議論の余地がある。ここでは,in vivoクローニングの基礎となる基本的な機構を明らかにし,in vivoクローニングのために最適化した菌株を構築した。さらに,単一マイクロ遠心分離管を用いてin vivoクローニングの手順を合理化した。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
