抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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細菌の遺伝子工学のための新しい技術の出現にもかかわらず,ABSTRACTは相同組換えによる対立遺伝子交換が遺伝子解析のための重要なツールである。現在,sacBに基づくベクターシステムは,しばしば対立遺伝子交換のために使用されるが,望ましい突然変異による細胞の分離を妨げる対選択脱出は,時々それらの有用性を制限する。これを回避するために,一連の”pTOX”対立遺伝子交換ベクターを操作した。各プラスミドは,広範囲の医学的に重要なプロテオバクテリアにおける潜在的有用性のために選択した誘導性毒素の1つをコードする。強い合成リボソーム結合部位を有するコドン最適化rhaS転写活性化剤は,内因性ラムノースレギュロンを欠く生物でも,強い毒素誘導を可能にする。青色AmilCPまたはmagenta TsPurple非蛍光クロモ蛋白質をコードする遺伝子の発現は,これらのベクターを用いて成功する単一および二重交差事象の監視を促進する。これらのベクターの汎用性は,Serratia marcescens,大腸菌O157:H7,Enterobacter cloacae,およびShigella flexneriの遺伝子欠失によって実証された。最後に,pTOXを用いて,染色体ampC β-ラクタマーゼ活性と対応するβ-ラクタム抗生物質耐性に及ぼす3つのパラログS.marcescensペプチドグリカンアミドヒドロラーゼの全ての組合せの破壊の影響を特徴づけた。多重アミドヒドロラーゼの変異は,高レベルのampC抑制とβラクタム耐性のために必要であった。これらのデータは,β-ラクタム耐性が,E.cloacaeのような他のAmpC産生病原体よりも,S.marcescensで頻繁に処理中に出現する理由を示唆する。まとめると,著者らの知見は,pTOXベクターがグラム陰性菌の遺伝子工学にとって広く有用であることを示唆する。細菌ゲノムのIMPORTANCE標的修飾は微生物の遺伝的分析に重要である。対立遺伝子交換は,相同組換えに依存する技術であり,遺伝子操作配列と天然遺伝子座を置換する。しかし,現在の対立遺伝子交換ベクターは,しばしば相同組換えの成功のための弱い選択を可能にする。いくつかの医学的に重要なプロテオバクテリアで検証された一連の新しい対立遺伝子交換ベクター,pTOXを開発した。それらは,統合ベクターを持つコロニーの容易な同定を可能にする可視非蛍光クロモ蛋白質をコードし,相同組換えの第二段階に対する厳密な選択を可能にする。β-ラクタム抗生物質耐性に対するSerratia marcescensペプチドグリカンアミドヒドロラーゼの不活性化の影響を調べるために,これらのベクターの有用性を示した。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
