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J-GLOBAL ID：202002254450897608   整理番号：20A1081604

タンデム遺伝子増幅を用いた単一ヌクレオチド変異の蛍光検出【JST・京大機械翻訳】

Fluorometric detection of single-nucleotide mutations using tandem gene amplification

著者 (6件)： Kim Dong-Min (Department of Bioscience and Biotechnology, Konkuk University, Gwangjin-gu, Seoul, 05029, Republic of Korea) ,  Seo Jina (Department of Bioscience and Biotechnology, Konkuk University, Gwangjin-gu, Seoul, 05029, Republic of Korea) ,  Kim Dong-Wook (Department of Hematology, Seoul St. Mary’s Hospital, Leukemia Research Institute, The Catholic University of Korea, Seoul, 06591, Republic of Korea) ,  Jeong Woong (Department of Emergency Medicine, Kyung Hee University Hospital, Kangdong-gu, Seoul, 05278, Republic of Korea) ,  Hwang Sang-Hyun (Department of Laboratory Medicine, University of Ulsan College of Medicine and Asan Medical Center, Songpa-gu, Seoul, 05505, Republic of Korea) ,  Kim Dong-Eun (Department of Bioscience and Biotechnology, Konkuk University, Gwangjin-gu, Seoul, 05029, Republic of Korea)
資料名： Sensors and Actuators. B. Chemical  (Sensors and Actuators. B. Chemical)
巻： 314  ページ： Null  発行年： 2020年 
JST資料番号： T0967A  ISSN： 0925-4005  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 単一ヌクレオチド突然変異(SNMs)の高感度で正確な同定は,分子診断と個人化医学の分野で重要になっている。ここでは,タンデム遺伝子増幅により複数のSNMsを検出するための高感度蛍光分析法を開発した。逆転写PCR(RT-PCR)は,G-四重鎖(GQ-RCA)を発生させる回転サークル増幅と結合した。タンデム遺伝子増幅において,サンプルRNAからのRT-PCR増幅DNAはラムダエキソヌクレアーゼで消化され,それは一本鎖DNA(ssDNA)を生成するためにアンプリコンDNAのリン酸化5′末端を持つ鎖を分解した。得られたssDNAは,単一塩基ミスマッチを識別することができるパックプローブDNAとハイブリッド化された。アンプリコンssDNAとパックプローブDNA間のミスマッチ塩基の存在に依存して,両末端の結合を評価した。結さつが起こった場合には,RCAに適したパックロックDNAの円形形態が生成された。RCAプロセスは,G-四重螺旋構造のタンデム反復を含むssDNAの長い伸長を発生させる。G-四重鎖を持つ増幅ssDNAを蛍光的に可視化し,チオフラビンTフルオロフォアを用いて定量した。著者らのアッセイは,野生型RNAとの混合物において,8.3fgの低いSNMを含む変異RNAを検出し,濃度が0.53%と低い変異RNAを検出した。タンデム遺伝子増幅による蛍光測定SNM検出法は,慢性骨髄性白血病患者から得られた臨床試料中のSNMsの多重検出に成功裏に適用された。著者らの方法は,適切な治療を受けた癌患者における複数のSNMsの早期検出とモニタリングのための臨床診断において有用である。Copyright 2020 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *蛍光 ,  DNA【核酸】 ,  RNA【核酸】 ,  エキソヌクレアーゼ ,  突然変異 ,  *ヌクレオチド ,  可視化 ,  *直列接続 ,  重鎖 ,  一本鎖DNA ,  *遺伝子増幅 ,  野生型
準シソーラス用語： アンプリコン ,  発蛍光団 ,  G-四重鎖 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： 一塩基変異 ,  多重検出 ,  タンデム遺伝子増幅 ,  ローリングサークル増幅 ,  G-四重鎖 ,  白血病

分類 (2件)： 遺伝学研究法  (EC01020N) ,  分析機器  (CC02020S)

タイトルに関連する用語 (4件)： タンデム ,  遺伝子増幅 ,  ヌクレオチド変異 ,  蛍光検出