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J-GLOBAL ID：202002255704420854   整理番号：20A1067614

ルーチン診断に用いる細菌細胞で発現したPolybia paulista WASP毒からの組換えホスホリパーゼA1の生産の改善【JST・京大機械翻訳】

Improved production of the recombinant phospholipase A1 from Polybia paulista wasp venom expressed in bacterial cells for use in routine diagnostics

著者 (10件)： Perez-Riverol Amilcar (Center for the Study of Social Insects, Department of General and Applied Biology, University of Sao Paulo State (UNESP/RC), Sao Paulo, Brazil) ,  Musacchio-Lasa Alexis (Center for Genetic Engineering and Biotechnology. Biomedical Research Division, System Biology Department, Havana, Cuba) ,  Fernandes Luis Gustavo Romani (Laboratory of Translational Immunology, School of Medical Sciences, University of Campinas (UNICAMP), Sao Paulo, Brazil) ,  dos Santos-Pinto Jose Roberto Aparecido (Center for the Study of Social Insects, Department of General and Applied Biology, University of Sao Paulo State (UNESP/RC), Sao Paulo, Brazil) ,  Esteves Franciele Grego (Center for the Study of Social Insects, Department of General and Applied Biology, University of Sao Paulo State (UNESP/RC), Sao Paulo, Brazil) ,  Bazon Murilo Luiz (Arthropod Molecular Biology Laboratory-LBMA-IB, University of Sao Paulo State (UNESP/RC), Rio Claro, SP, Brazil) ,  Zollner Ricardo de Lima (Laboratory of Translational Immunology, School of Medical Sciences, University of Campinas (UNICAMP), Sao Paulo, Brazil) ,  Palma Mario Sergio (Center for the Study of Social Insects, Department of General and Applied Biology, University of Sao Paulo State (UNESP/RC), Sao Paulo, Brazil) ,  Brochetto-Braga Marcia Regina (Arthropod Molecular Biology Laboratory-LBMA-IB, University of Sao Paulo State (UNESP/RC), Rio Claro, SP, Brazil) ,  Brochetto-Braga Marcia Regina (Venoms and Venomous Animal Studies Center-CEVAP, University of Sao Paulo State (UNESP), Lageado Experimental Farm, Botucatu, SP, Brazil)
資料名： 3 Biotech  (3 Biotech)
巻： 10  号： 5  ページ： 217  発行年： 2020年 
JST資料番号： W3974A  ISSN： 2190-5738  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： ドイツ (DEU)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： ホスホリパーゼA1(PLA1)は,ブラジル南東部からの臨床的に関連したハチであるP.paulista(膜翅目:Vespidae)の毒液において同定された3つの主要アレルゲンの1つである。このアレルゲンの組換え型(rpoly1)は,毒アレルギーの分子診断の開発に使用できる。大腸菌BL21(DE3)細胞を用いてrポリp1を生産するための初期試みは,不溶性rpoly1の高収率をもたらしたが,低レベルの可溶化蛋白質回収(12%)をもたらした。ここでは,発現の異なる条件,封入体の可溶化および蛋白質精製を試験することにより,大腸菌におけるrpoly1の生産を改善することを目的とした。結果は,16°Cと0.1mMのIPTGにおける発現が,不溶性型ではあるがrpoly1の産生を増加させたが,0.15M NaCl,6M尿素,pH2.6,25°Cで2時間の培養後に高い可溶化蛋白質収率を示した。毒アレルゲンは,Pichia pastoris X-33細胞における分泌蛋白質としての可溶性発現のためにpPICZαAベクターにおいてクローン化され,培養上清においてほとんど検出できないレベル(ナノグラム)を示した。対照的に,可溶化及び精製rpoly1収率(1.5g/Lの発酵ブロス)の7倍の増加が大腸菌における改良生産後に得られた。蛋白質の同一性を抗His抗体とMSスペクトルで確認した。アレルゲン特異的IgE(sIgE)仲介認識をアレルギー患者(n=40)の血清による免疫ブロッティングで評価した。さらに,rpoly1は高レベルの診断感度(95%)を示した。ここで述べたrpoly1生産のための最適化戦略は,その後の蛋白質再折畳み,免疫学的特性化段階,および最終的にP.paulista毒アレルギーに対する分子診断の開発に必要なアレルゲンの量を提供する。Copyright King Abdulaziz City for Science and Technology 2020 Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 最適化 ,  質量スペクトル ,  大腸菌 ,  可溶化 ,  アレルギー反応 ,  アレルゲン ,  血清 ,  抗体 ,  タンパク質 ,  封入体 ,  スズメバチ科 ,  クローン ,  ベクター ,  *ホスホリパーゼA1
準シソーラス用語： Pichia pastoris , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (6件)： Polybia Paulista ,  組換えホスホリパーゼA1 ,  回収 ,  可溶化 ,  分子診断 ,  毒アレルギー

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N)

タイトルに関連する用語 (8件)： ルーチン ,  診断 ,  細菌細胞 ,  発現 ,  WASP ,  毒 ,  組換え ,  ホスホリパーゼA1