抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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[目的]Sclerotiniasclerotiorumによる菌核病は中国のアブラナ栽培における主要な問題であり、菜種収量と品質を脅かす。分泌性蛋白は病原菌の病原性過程において重要な役割を果たし、核盤菌ゲノムには分泌性タンパク質をコードする遺伝子を多く含んでおり、本研究は病原性に関連する分泌タンパク質遺伝子を同定し、選別し、核の病原菌の発病機序を明らかにし、菌核病の予防と治療に重要な標的を提供する。【方法】SCOP,Pfam,SCOP,PDBデータベースは機能アノテーションを行う。pTRV2-GeneとpTRV2-GFPベクターを,遺伝子特異的プライマーを用いてPCRによって増幅した。その後,pTRV1とpTRV2-Gene,pTRV1,およびpTRV2-GFPベクターを含む再懸濁菌を等量に混合した。3時間静置後,pTRV2-Geneベクターと対照(TRV-GFP)を5-6週齢のタバコ(Nicotianabenthamiana)に感染させた。感染植物は暗い環境で48時間培養した後、正常な光照射条件の環境で7日間生育した。直径6mmのコアディスク菌PDA菌糸塊を9日間感染したタバコ葉の葉腹の中央に接種し、その中、菌面に葉をつけ、その後、接種株を48時間培養後、病斑面積を統計した。48時間接種後の病斑と病斑周囲組織葉(腐敗組織縁から1cm前後)のRNAを抽出し、特異的プライマーを用いて目的遺伝子のqRT-PCRを行い、目的遺伝子がTRV-HIGSベクターを携帯したタバコ植物における相対発現量を計算した。[結果]SMARTとドメインアノテーションは、これらの8つの候補遺伝子がタンパク質、核酸あるいは多糖の加水分解に関与し、植物の免疫反応に影響し、核ディスク菌による薬物耐性の調節及びビオチン合成に関与することを示唆した。これらの8つの遺伝子を運ぶTRV-HIGSベクターと対照ベクターのタバコを接種し,48時間後の対照植物の病斑面積は平均3.44cm2であり,SS1G_07655を除く。その他の7つの候補遺伝子のTRV-HIGS植物における病斑面積は対照株より著しく小さく(P≦0.05)、その病斑面積は1.63-2.61cm2.qRT-PCRの結果であった。これらの7つの病原性関連の候補遺伝子は,タバコの感染中の遺伝子発現水を対照(P≦0.05)より著しく低かった。【結語】TRV媒介HIGS技術を用いて,8つの未知機能の分泌蛋白質遺伝子の機能同定に成功し,7つの病原性関連遺伝子をスクリーニングした。その中で,最も病原性の高いSS1G_03146予測は,リボザイムのビオチン生合成に関与し,一方,SS1G_043とSS1G_11912は,植物の免疫反応に関与する可能性がある。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】