大腸菌におけるメガベースサイズのプラスミド構築の課題の克服【JST・京大機械翻訳】

Mukai Takahito; Yoneji Tatsuya; Yamada Kayoko; Fujita Hironobu; Nara Seia; Su’etsugu Masayuki

文献

J-GLOBAL ID：202002265809300748 整理番号：20A1861660

大腸菌におけるメガベースサイズのプラスミド構築の課題の克服【JST・京大機械翻訳】

Overcoming the Challenges of Megabase-Sized Plasmid Construction in Escherichia coli

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資料名：
巻： 9 号： 6 ページ： 1315-1327 発行年： 2020年
JST資料番号： W5048A ISSN： 2161-5063 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：アメリカ合衆国 (USA) 言語：英語 (EN)

Escherichia coliはプラスミド構築のための一般的なツールであるが,この細菌はサイズが500キロ塩基を超える大きなプラスミドを構築するための「不適当」と考えられている。従来のプラスミドベクターは,このような大きなプラスミドの安定な複製と分離に必要ないくつかの調節DNA要素を欠くと仮定した。加えて,少数の部位特異的組換え系の使用は,大きなDNAセグメントのクローニングを促進する可能性がある。ここでは,新しい細菌人工染色体(BAC)ベクターを用いて,1-メガ塩基(1-Mb)二次染色体を構築するための2つの戦略を示した。第1に,ゲノム還元大腸菌株の3-Mbゲノムは2つの染色体(2-Mbと1-Mb)に分割され,その小さなものは複製の起源とVibrio tubiashii二次染色体の分割遺伝子座を持つ。この染色体分裂法(Flp-POPクローニング)は,分裂クロラムフェニコール耐性遺伝子の再集合と一致し,クロラムフェニコール選択を可能にする,フリプターゼが仲介する除去を介し機能する。次に,1-Mbプラスミドを開発するための新しいクローニング法(oriT-POPクローニング)と完全装備BACベクター(pMegaBAC1H)を開発した。2つの0.5-Mbゲノム領域は,共役を介して2つのドナー株からレシピエント株まで連続して転写され,レシピエント株においてpMegaBAC1Hによって捕獲され,1-Mbプラスミドを産生した。この1-Mbプラスミドは共役を介して他の大腸菌株に伝達可能であった。さらに,これらの1-Mb二次染色体は再構成大腸菌染色体複製サイクル反応(RCR)を用いてin vitroで増幅可能であった。これらの戦略と技術は,一般的なE.coli細胞を設計者染色体工学のための生産工場にする。Copyright 2020 American Chemical Society All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

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遺伝子操作 , 微生物の生化学

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