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J-GLOBAL ID：202002267711815787   整理番号：20A2758630

コムギ胚細胞フリー蛋白質発現のための多重親和性タグを持つ発現ベクターの新規ファミリー【JST・京大機械翻訳】

A novel family of expression vectors with multiple affinity tags for wheat germ cell-free protein expression

著者 (4件)： Nagy Szilvia Krisztina (Department of Medical Chemistry, Molecular Biology and Pathobiochemistry, Semmelweis University, Budapest, Hungary) ,  Kallai Brigitta Margit (Department of Medical Chemistry, Molecular Biology and Pathobiochemistry, Semmelweis University, Budapest, Hungary) ,  Andras Judit (Department of Medical Chemistry, Molecular Biology and Pathobiochemistry, Semmelweis University, Budapest, Hungary) ,  Meszaros Tamas (Department of Medical Chemistry, Molecular Biology and Pathobiochemistry, Semmelweis University, Budapest, Hungary)
資料名： BMC Biotechnology (Web)  (BMC Biotechnology (Web))
巻： 20  号： 1  ページ： 1-9  発行年： 2020年 
JST資料番号： U7348A  ISSN： 1472-6750  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 無細胞蛋白質発現は,蛋白質の機能的および構造的研究におけるin vivo,細胞ベースシステムの広く使われる代替となっている。コムギ胚芽に基づく方法は,その柔軟性,高い翻訳効率および適切に折畳まれた真核生物蛋白質合成の成功率により,市販の真核生物のin vitro翻訳システムから外れる。pEU3-NIIベクターを含む元のT7プロモーターは,組換えプラスミドの生成を促進し,アフィニティー精製を可能にし,精製,タグフリー標的蛋白質の産生を可能にするため,ライゲーション非依存性クローニング部位,His6およびGSTタグおよびTEVプロテアーゼ切断部位の添加により以前に改善された。ここでは,in vitro転写前にベクター線形化段階を単純化するため,希少切断,NotI制限酵素切断部位を挿入することにより,pEU3-NIIベクターの更なる開発を述べた。さらに,His12,FLAG,およびHalo親和性タグコーディングベクターを作成し,検出感度,相互作用研究の特異性を増加させ,プルダウンアッセイのための共有結合性リガンドをそれぞれ提供した。最後に,提示したGST-His6およびGST-ビオチン二重標識ベクターは,蛋白質-蛋白質相互作用研究の可能性の範囲を広げることができた。pEU3-NIIベクターファミリーの新世代は,広範な親和性タグを有する標的蛋白質の翻訳的に活性なmRNAとコムギ胚芽無細胞発現の迅速な生産を可能にし,蛋白質のin vitro研究のための柔軟で多様な実験配置の設計を可能にする。Copyright 2020 The Author(s) All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 相互作用 ,  mRNA ,  *コムギ ,  *タンパク質 ,  タンパク質合成 ,  ペプチド結合ヒドロラーゼ ,  プロモーター領域 ,  *親和性 ,  真核生物 ,  *ベクター ,  in vitro実験
準シソーラス用語： FLAG ,  *蛋白質発現 ,  クローニング ,  プルダウンアッセイ , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (7件)： 無細胞 ,  蛋白質発現 ,  コムギ胚芽 ,  TEV ,  親和性タグ ,  FLAG ,  ハロー

分類 (2件)： 遺伝子操作  (EC02050B) ,  蛋白質・ペプチド一般  (EB03010N)

引用文献 (22件)：

• Nat Methods; Human protein factory for converting the transcriptome into an in vitro-expressed proteome; N Goshima, Y Kawamura, A Fukumoto, A Miura, R Honma, R Satoh; 5; 2008; 1011-1017; 10.1038/nmeth.1273; citation_id=CR1
• FEBS Lett; Wheat germ systems for cell-free protein expression; M Harbers; 588; 2014; 2762-2773; 10.1016/j.febslet.2014.05.061; citation_id=CR2
• Proc Natl Acad Sci U S A; A cell-free protein synthesis system for high-throughput proteomics; T Sawasaki, T Ogasawara, R Morishita, Y Endo; 99; 2002; 14652-14657; 10.1073/pnas.232580399; citation_id=CR3
• Nucleic Acids Res; Oligoribonucleotide synthesis using T7 RNA polymerase and synthetic DNA templates; JF Milligan, DR Groebe, GW Witherell, OC Uhlenbeck; 15; 1987; 8783-8798; 10.1093/nar/15.21.8783; citation_id=CR4
• BMC Biotechnol; A set of ligation-independent in vitro translation vectors for eukaryotic protein production; V Bardóczy, V Géczi, T Sawasaki, Y Endo, T Mészáros; 8; 2008; 1-7; 10.1186/1472-6750-8-32; citation_id=CR5

タイトルに関連する用語 (8件)： コムギ ,  胚細胞 ,  蛋白質発現 ,  多重 ,  親和性 ,  タグ ,  発現ベクター ,  ファミリー