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J-GLOBAL ID：202002271404354959   整理番号：20A1976490

KANSL1蛋白質の真核細胞発現精製および機能検証【JST・京大機械翻訳】

Eukaryotic expression and purification of KANSL1 protein and its functional verification

著者 (7件)： Wen Kaiqing (軍事科学院軍事医学研究院生物医学分析中心,北京,100850) ,  Li Ting (軍事科学院軍事医学研究院生物医学分析中心,北京,100850) ,  Zhang Yakun (軍事科学院軍事医学研究院生物医学分析中心,北京,100850) ,  Han Qiuying (軍事科学院軍事医学研究院生物医学分析中心,北京,100850) ,  Zhao Jie (軍事科学院軍事医学研究院生物医学分析中心,北京,100850) ,  Pan Xin (軍事科学院軍事医学研究院生物医学分析中心,北京,100850) ,  Li Teng (軍事科学院軍事医学研究院生物医学分析中心,北京,100850)
資料名： Junshi Yixue  (Junshi Yixue)
巻： 43  号： 11  ページ： 846-850  発行年： 2019年 
JST資料番号： C2949A  ISSN： 1674-9960  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： 【目的】昆虫バキュロウイルス発現系(Bac-to-Bac)を用いてKANSL1蛋白質を発現させ,精製して,invitroでのチューブリン重合に及ぼすこの蛋白質の影響を評価する。【方法】真核生物発現ベクターpFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1を構築し,組換えプラスミド(Bacmid)を大腸菌DH10Bacに形質転換した。組換えバキュロウイルスを産生するために,Bacmidをリポフェクタミンでトランスフェクションし,Sf9細胞(Sf9cell)に形質移入した。その後、この組換えバキュロウイルスで感染し、Sf9細胞を増幅し、His-mCherry-KANSL1融合タンパク質を大量に発現させた。His-mCherry-KANSL1融合蛋白質を,Ni-カラムアフィニティークロマトグラフィーによって精製し,そして,精製を,高速蛋白質液体クロマトグラフィー(FPLC)によって,さらに精製し,そして,ウエスタンブロットおよびクマシーブリリアントブルー染色によって,目的蛋白質の発現を,同定した。最後に,チューブリン重合に及ぼすKANSL1蛋白質の影響を,invitroでの微小管重合実験によって分析した。【結果】プラスミドシークエンシングは,pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1真核生物発現プラスミドの構築に成功したことを示した。クマシーブリリアントブルー染色、Westernブロッティングにより、精製により正確なHis-mCherry-KANSL1タンパク質が得られ、体外微小管重合実験により、KANSL1タンパク質が微小管タンパク質の重合を顕著に促進することを示した。結論:pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1真核発現プラスミドの構築に成功し、真核発現系において発現及び純化し、組換えKANSL1タンパク質は微小管重合を促進する作用があり、後続のKANSL1タンパク機能研究に基礎を築いた。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 大腸菌 ,  重合 ,  *タンパク質 ,  染色 ,  昆虫類 ,  プラスミド ,  *真核細胞 ,  チューブリン ,  真核生物 ,  トランスフェクション ,  バキュロウイルス科 ,  融合タンパク質 ,  ウェスタンブロット法
準シソーラス用語： Sf9細胞 ,  発現ベクター , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (3件)： 分子遺伝学一般  (EC02010J) ,  細胞生理一般  (EF02010S) ,  遺伝子発現  (EC02040Q)

タイトルに関連する用語 (4件)： 真核細胞 ,  発現 ,  精製 ,  検証