抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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【目的】RAW264.7細胞におけるエレクトロポレーションによるTRIB3過剰発現およびTRIB3siRNAのトランスフェクションの条件をスクリーニングし,そして,RAW264.7細胞に対する最適エレクトロポレーショントランスフェクション法を確立する。方法:パルス電圧、パルス時間の長さとプラスミド濃度などの条件を変えることで、ベクターをpCMV6-EntryのTRIB3過発現プラスミドとTRIB3siRNAをRAW264.7細胞にトランスフェクションし、24h後位相差顕微鏡で細胞形態を観察した。細胞生存率をCCK-8によって測定し,そして,72時間後,ウエスタンブロット法によってTRIB3蛋白質発現を検出し,遺伝子発現の変化を検証した。結果:(1)異なるパルス電圧でトランスフェクションした時、110と120mVグループの細胞形態と生存率は対照グループと差異がなく、130と140mVグループの懸濁細胞の多く、細胞の生存率は対照グループより明らかに低かった(P<0.01)。130と140mV群のTRIB3蛋白質発現は有意に増加した(P<0.05)。(2)異なるパルスでトランスフェクションした時、10と20ms群の細胞形態と生存率は対照群と差がなく、30ms群の細胞生存率は対照群より明らかに低く(P<0.01)、20と30ms群のTRIB3タンパク発現は有意に増加した(P<0.01)。(3)異なるプラスミド濃度でトランスフェクションした時、2と4μg群の細胞形態と生存率は対照群と差がなく、6μg群の細胞生存率は対照群より低く(P<0.05)、4μg群のTRIB3発現は有意に増加した(P<0.01)。(4)120mV,20msで異なる濃度のTRIB3siRNAをトランスフェクションした時,各群の細胞形態と生存率は対照群と差がなかったが,10nmol/L群のTRIB3発現は対照群の0.19倍(P<0.01)であった。【結語】120mV,20msで,RAW264.7細胞において,TRIB3過剰発現プラスミド(サンプル4μg)およびTRIB3siRNA(10nmol/L)をエレクトロポレーションした。より高い細胞生存率を保証すると同時に、目的遺伝子のタンパク質の発現レベルを顕著に変化させ、後続のRAW264.7細胞におけるプラスミドのトランスフェクションに関する基礎研究に実験的根拠と参考を提供した。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】
