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J-GLOBAL ID：202002283577101900   整理番号：20A0498565

CD19の形状への獲得: CAR-T細胞の染色と刺激のための天然折畳み「難発現」CD19の発現【JST・京大機械翻訳】

Getting CD19 Into Shape: Expression of Natively Folded “Difficult-to- Express” CD19 for Staining and Stimulation of CAR-T Cells

著者 (8件)： Lobner Elisabeth (Department of Biotechnology, University of Natural Resources and Life Sciences, Vienna, Austria) ,  Wachernig Anna (Department of Biotechnology, University of Natural Resources and Life Sciences, Vienna, Austria) ,  Gudipati Venugopal (Institute for Hygiene and Applied Immunology, Center for Pathophysiology, Infectiology and Immunology, Medical University of Vienna, Vienna, Austria) ,  Mayrhofer Patrick (Department of Biotechnology, University of Natural Resources and Life Sciences, Vienna, Austria) ,  Salzer Benjamin (St. Anna Children’s Cancer Research Institute, Vienna, Austria) ,  Lehner Manfred (St. Anna Children’s Cancer Research Institute, Vienna, Austria) ,  Huppa Johannes B. (Institute for Hygiene and Applied Immunology, Center for Pathophysiology, Infectiology and Immunology, Medical University of Vienna, Vienna, Austria) ,  Kunert Renate (Department of Biotechnology, University of Natural Resources and Life Sciences, Vienna, Austria)
資料名： Frontiers in Bioengineering and Biotechnology (Web)  (Frontiers in Bioengineering and Biotechnology (Web))
巻： 8  ページ： 49  発行年： 2020年 
JST資料番号： U7059A  ISSN： 2296-4185  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： スイス (CHE)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 膜貫通蛋白質CD19は,正常および悪性B細胞で排他的に発現し,したがって,承認されたCAR-T細胞に基づく癌免疫療法の標的を構成する。in vitroおよびin vivoの両方で定量的にCAR-T細胞機能性を評価する現在の努力は,「困難な発現」(DTE)蛋白質と考えられるCD19(CD19-ECD)の適切に折畳まれた組換え細胞外ドメインの限られた利用可能性により妨げられている。ここでは,組換えCHO-K1産生細胞系の生成のためにRosa26細菌人工染色体ベクター骨格に組み込まれたヒト血清アルブミン(CD19-AD2)のCD19とドメイン2の完全長細胞外ドメインから成る新規融合構築物を成功裏に発現した。化学シャペロンとしてバルプロ酸を用いることにより,生成物の力価をさらに高めることができた。精製単量体CD19-AD2は,非還元SDS-PAGE及びSEC-MALS測定により示されたように安定であることを証明した。さらに,フローサイトメトリー分析は,CD19-AD2のCD19-CAR-T細胞への特異的結合を明らかにした。最後に,CD19-AD2修飾平面支持脂質二分子層の使用によりCD19-CAR-T細胞を効果的に刺激することに成功したので,著者らのCD19-AD2融合構築物の生物学的活性を示した。Copyright 2020 The Author(s) All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *T細胞 ,  タンパク質 ,  脂質二分子膜 ,  in vitro実験 ,  単量体 ,  フローサイトメトリー ,  膜貫通タンパク質 ,  ベクター ,  SDS-PAGE ,  生物活性
準シソーラス用語： ドメイン構造 ,  ヒト血清アルブミン ,  生細胞 ,  細胞機能 ,  *CD19抗原 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (7件)： CD19 ,  難発現蛋白質 ,  BAC ,  化学シャペロン ,  T細胞活性化 ,  CAR-T細胞 ,  TIRF

分類 (2件)： 細胞生理一般  (EF02010S) ,  遺伝子発現  (EC02040Q)

引用文献 (84件)：

• Alves C. S., Dobrowsky T. M. (2017). Strategies and considerations for improving expression of “difficult to express” proteins in CHO cells. Methods Mol. Biol. 1603 1-23. doi: 10.1007/978-1-4939-6972-2_1
• Armbruster D. A., Pry T. (2008). Limit of blank, limit of detection and limit of quantitation. Clin. Biochem. Rev. 29(Suppl. 1), S49-S52. doi: 10.1007/978-1-4939-6972-2_1
• Axelrod D., Thompson N. L., Burghardt T. P. (1983). Total internal inflection fluorescent microscopy. J. Microsc. 129 19-28. doi: 10.1016/b978-012164730-8/50130-1
• Axmann M., Schutz G. J., Huppa J. B. (2015). Single molecule fluorescence microscopy on planar supported bilayers. J. Vis. Exp. 105:e53158. doi: 10.1016/b978-012164730-8/50130-1
• Backliwal G., Hildinger M., Kuettel I., Delegrange F., Hacker D. L., Wurm F. M. (2008). Valproic acid: a viable alternative to sodium butyrate for enhancing protein expression in mammalian cell cultures. Biotechnol. Bioeng. 101 182-189. doi: 10.1002/bit.21882

タイトルに関連する用語 (7件)： CD19 ,  獲得 ,  T細胞 ,  染色 ,  刺激 ,  折畳み ,  発現