抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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ABSTRACTUn特異的ペルオキシゲナーゼ(UPO)は,高度に無害な生体触媒であり,その選択的モノ(per)オキシゲナーゼ活性は,多くの合成化学応用に有用である。指向性酵素進化のためのライブラリー作成法の幅広いレパートリーの中で,遺伝的ドリフトは変異体の多型ネットワーク内に徐々に蓄積される中性変異を可能にする。本研究では,Saccharomyces cerevisiaeにおけるUPOによる遺伝的ドリフトのキャンペーンを行い,中性変異を単純に添加し,組換えin vivoで組換えした。低変異負荷と親の天然機能の45%の活性閾値により,折畳み活性UPO変異体に富む変異体ライブラリーが生成された。遺伝的ドリフトとDNAシャッフリングの8回のみの後,著者らは,過酸化と過酸化活性,速度論的熱安定性,および有機溶媒への耐性の強化によって,25の中立的に進化した変異体の集合を同定した。クローン当たり導入された平均4.6置換で,中性変異は蛋白質配列のおよそ10%をカバーした。したがって,本研究は,in vivoで中性の遺伝子ドリフトとDNA組換えを一緒にすることによって,UPO設計のための新しい道を開いた。IMPORTANCEFungalペルオキシゲナーゼはチトクロームP450モノオキシゲナーゼの過酸化物シャント経路に似ており,広範囲の有機化合物で非活性化C-H結合の選択的オキシ官能化を行う。本研究では,中性遺伝子ドリフトとin vivoDNAシャフリングを組合せて,高機能ペルオキシゲナーゼ変異体ライブラリーを作成した。中性に進化したペルオキシゲナーゼのパネルは,過酸化基質に対して異なる活性プロファイルを示し,温度や有機共溶媒の存在に関して安定性を改善し,酵素が新たな進化キャンペーンのための貴重な青写真を作る。DNA組換えと中性ドリフトのこの会合は,ペルオキシゲナーゼ工学における将来の研究の道筋であり,より一般的な展望から,S.cerevisiaeで異種発現した他の酵素系への道筋である。Please refer to the publisher for the copyright holders. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】
