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J-GLOBAL ID：202002288605277921   整理番号：20A0975076

ヒトHEK293細胞で安定に発現する組換えヒトR-Spondin1(Rspo1)蛋白質の生産,精製及び特性化【JST・京大機械翻訳】

Production, purification and characterization of recombinant human R-spondin1 (RSPO1) protein stably expressed in human HEK293 cells

著者 (8件)： Levin Gabriel (Cell and Molecular Therapy Center (NUCEL), Medical School, University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil) ,  Koga Bruna Andrade Aguiar (Cell and Molecular Therapy Center (NUCEL), Medical School, University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil) ,  Koga Bruna Andrade Aguiar (Department of Surgery, School of Veterinary Medicine and Animal Science, University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil) ,  Belchior Gustavo Gross (Cell and Molecular Therapy Center (NUCEL), Medical School, University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil) ,  Carreira Ana Claudia Oliveira (Cell and Molecular Therapy Center (NUCEL), Medical School, University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil) ,  Carreira Ana Claudia Oliveira (Department of Surgery, School of Veterinary Medicine and Animal Science, University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil) ,  Sogayar Mari Cleide (Cell and Molecular Therapy Center (NUCEL), Medical School, University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil) ,  Sogayar Mari Cleide (Biochemistry Department, Chemistry Institute, University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil)
資料名： BMC Biotechnology (Web)  (BMC Biotechnology (Web))
巻： 20  号： 1  ページ： 1-14  発行年： 2020年 
JST資料番号： U7348A  ISSN： 1472-6750  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： R-Spondin蛋白質は,Wnt経路を誘導することにより,細胞増殖,分化および死において重要な役割を果たすことが知られている分泌蛋白質のファミリーを構成する。いくつかの研究は,多くの組織特異的過程,すなわち,骨形成,骨格筋組織発達,膵臓β細胞および腸幹細胞の増殖,および癌の調節におけるRSPOの重要性を示している。Rspo1は,幹細胞におけるそのマイトジェン活性により,特に再生医学分野において,その潜在的治療的使用に関してRSPO分子の間で立っている。ここでは,HEK293細胞系を用いて組換えヒトRSPO1(rhRSPO1)を生成し,細胞療法に使用される精製,特性化および生物学的に活性な蛋白質産物を得た。hRSPO1コード配列を合成し,哺乳類細胞発現ベクターにサブクローニングした。HEK293細胞を,hRSPO1コード配列を含む組換え発現ベクターとハイグロマイシン耐性プラスミドを用いて安定的に共形質移入し,形質移入HEK293細胞の培養上清からrhRSPO1を得て,2つの逐次クロマトグラフィー,すなわちヘパリン親和性クロマトグラフィー,続く分子排除クロマトグラフィーを用いて精製し,高純度生成物を得た。精製した蛋白質を,ウエスタンブロット法,質量分析およびin vitro(C2C12細胞)およびin vivo(BALB/cマウス)生物学的活性アッセイにより特性化し,このヒト細胞発現系の構造的完全性および生物学的効果を確認した。さらに,rhRSPO1グリコシル化分析により,このオリゴ糖鎖のグリカン組成を初めて記述することができ,以前に述べたようにポリペプチド鎖の残基Asn137におけるN-グリコシル化の存在を確認した。加えて,この分析は,末端シアル酸,N-アセチルグルコサミンおよび/またはガラクトースのようなグリカン構造の存在を明らかにした。したがって,HEK293細胞からの組換えhRSPO1の生産と精製のための安定したプラットフォームが生成され,精製された完全に特性化された生物学的に活性な蛋白質生成物の生産が課題工学に適用された。Copyright 2020 The Author(s) All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： ポリペプチド ,  ヒト ,  ヘパリン ,  哺乳類 ,  少糖類 ,  細胞増殖 ,  生物活性 ,  プラスミド ,  グリコシル化 ,  幹細胞 ,  トランスフェクション ,  ウェスタンブロット法 ,  *HEK293細胞
準シソーラス用語： グリカン ,  発現ベクター , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： 組織工学 ,  異種哺乳類蛋白質発現系 ,  組換えヒトR-Spondin1(RSPO1) ,  ペプチド成長因子 ,  HEK293細胞

分類 (2件)： 細胞生理一般  (EF02010S) ,  生物学的機能  (EB03040U)

引用文献 (67件)：

• Cold Spring Harb Perspect Biol; Wnt signaling from development to disease: insights from model systems; KM Cadigan, M Peifer; 1; 2; 2009; a002881; 10.1101/cshperspect.a002881; citation_id=CR1
• Development; Towards an integrated view of Wnt signaling in development; R Amerongen, R Nusse; 136; 19; 2009; 3205-3214; 10.1242/dev.033910; citation_id=CR2
• Biochim Biophys Acta; R-spondin, a novel gene with thrombospondin type 1 domain, was expressed in the dorsal neural tube and affected in Wnts mutants; T Kamata, K Katsube, M Michikawa, M Yamada, S Takada, H Mizusawa; 1676; 1; 2004; 51-62; 10.1016/j.bbaexp.2003.10.009; citation_id=CR3
• Dev Cell; R-Spondin2 is a secreted activator of Wnt/beta-catenin signaling and is required for Xenopus myogenesis; O Kazanskaya, A Glinka, I Barco Barrantes, P Stannek, C Niehrs, W Wu; 7; 4; 2004; 525-534; 10.1016/j.devcel.2004.07.019; citation_id=CR4
• Cell Signal; Cellular signaling and biological functions of R-spondins; JK Yoon, JS Lee; 24; 2; 2012; 369-377; 10.1016/j.cellsig.2011.09.023; citation_id=CR5

タイトルに関連する用語 (7件)： ヒト ,  HEK293細胞 ,  発現 ,  組換え ,  蛋白質 ,  精製 ,  特性化